對分別轉有MxIRT1及OsNramp1的轉基因酵母進行的蛋白質組及轉錄本組分析.pdf

1、MxlRTl和OsNrampl分別是從小金海棠和水稻根中克隆得到的金屬轉運蛋白。異源功能互補實驗證明兩種基因均可以互補酵母雙突變體角t3fet4中鐵的吸收。本研究從蛋白質組和轉錄本組兩個水平對基因及其引起的變化進行研究。 研究的第一部分利用蛋白質雙向電泳及肽質量指紋譜技術分別對過鐵及缺鐵條件下的轉IRT菌株、正常鐵處理條件下的轉Nramp及轉空載體菌株、正常鐵處理及缺鐵處理條件下分別轉有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株進行

2、了蛋白質組分析。通過蛋白質雙向電泳技術每種處理條件下的酵母菌株均可分離得到1500個左右的蛋白點。其中對過鐵及缺鐵條件下的轉IRT菌株檢索得到8個差異蛋白，分別與細胞骨架、分子伴侶、氨基酸合成，甘油合成等相關；正常鐵處理條件下的轉Nramp及轉空載體菌株中檢索得到9個差異蛋白，分別與分子伴侶、糖代謝、亞精胺合成、抗氧化作用等相關；對正常鐵處理及缺鐵處理條件下分別轉有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株檢索得到11個差異蛋白，除1個為功能

3、未知蛋白外，其它10個差異分別是與糖代謝、蛋白質的生物合成、細胞抗毒害、膜泡運輸及信號轉導相關的蛋白。 研究的第二部分利用基因芯片技術對正常鐵處理條件下分別轉有空載體、IRT及Nramp的酵母菌株進行了轉錄本組分析。提取酵母總RNA，通過反轉錄標記生物素，進行酵母10928個eDNA的芯片雜交。其中，轉IRT菌株相對于轉空載體菌株上調表達的基因為1200個，下調表達的基因為1140個；轉Nramp菌株相對于轉空載體菌株上調表達

4、的基因為290個，下調表達的基因為108個。對轉Nramp菌株中差異性較為顯著的27個上調表達基因和45個下調表達基因進行分析發(fā)現，上調表達基因多為與鋅指結構相關、與RNA結合、調節(jié)子或抑制子和高滲誘導表達基因，下調表達基因多為與膜泡運輸、細胞通訊、細胞周期和蛋白質的合成相關。 推測在轉基因酵母中，由于IRT或是Nramp的轉入，單基因多效作用比較明顯。除了DNA復制、RNA轉錄、蛋白質合成、氧化呼吸作用等效應有明顯的變化外，