HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞比較蛋白質(zhì)組學(xué)及血清組學(xué)研究.pdf

1、乙型肝炎是一種在全球范圍內(nèi)流行的肝臟疾病，尤其在發(fā)展中國(guó)家。盡管目前HBV感染機(jī)制的研究得到較大的發(fā)展，但其成果主要集中在HBV感染與免疫系統(tǒng)的關(guān)系上，而HBV感染對(duì)宿主細(xì)胞的影響目前尚不清楚。越來(lái)越多的證據(jù)表明，HBV病毒對(duì)于肝細(xì)胞蛋白的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，不同的病毒蛋白組合將產(chǎn)生不同的影響。另一方面，由HBV誘導(dǎo)的差異變化蛋白還可能打破機(jī)體的免疫耐受，使機(jī)體產(chǎn)生免疫識(shí)別而形成自身抗體。本研究旨在進(jìn)一步探討HBV病毒對(duì)肝細(xì)胞蛋白質(zhì)譜表達(dá)

2、的影響，并比較不同HBV蛋白存在狀態(tài)下肝細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)變化的聯(lián)系和差異。同時(shí)利用雙向電泳和免疫印跡技術(shù)鑒定HBV轉(zhuǎn)基因小鼠和HBV病人血清中針對(duì)肝細(xì)胞蛋白的自身反應(yīng)性抗體。 首先我們?cè)蛛x并比較了含有HBV全基因的HBV-Tg小鼠和對(duì)照小鼠肝細(xì)胞蛋白質(zhì)譜的差異。共有27個(gè)差異表達(dá)的蛋白被鑒定出，包括17個(gè)表達(dá)上調(diào)的蛋白和10個(gè)表達(dá)下調(diào)的蛋白。生物信息學(xué)分析得出，其中13個(gè)蛋白為參與代謝、三羧酸循環(huán)和氧化應(yīng)激的線粒體蛋白，表明肝

3、細(xì)胞線粒體功能和氧化應(yīng)激受到影響。4個(gè)蛋白(SELENBP,SCP2，RGN和PRDX1)表達(dá)的差異在HBV慢性感染病人標(biāo)本中得到了確認(rèn)。結(jié)果還表明，HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟中參與氧化應(yīng)激的重要基因(gpx，sod、ogg等)顯著上調(diào)。同時(shí)，在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟線粒體中反應(yīng)性氧自由基產(chǎn)生明顯升高而ATP的產(chǎn)量顯著下調(diào)。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明，HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝細(xì)胞對(duì)于過(guò)氧化氫的毒性作用更加敏感。 本研究還比較了不同HBV蛋白存在狀態(tài)下肝

4、細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)變化的異同。首先將HBs-Tg這種部分HBV基因轉(zhuǎn)入的小鼠與其對(duì)照小鼠肝細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)比較。質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明，共有20個(gè)蛋白發(fā)生變化，其中上調(diào)的蛋白16種，下調(diào)的蛋白4種。綜合分析HBV全基因轉(zhuǎn)入小鼠和部分基因轉(zhuǎn)入小鼠蛋白質(zhì)變化譜，發(fā)現(xiàn)在部分HBV基因轉(zhuǎn)入的小鼠中鑒定出所有20種差異蛋白中有16個(gè)蛋白的變化與HBV轉(zhuǎn)基因小鼠相吻合。 雙向電泳-免疫印跡技術(shù)發(fā)現(xiàn)HBV-Tg小鼠和HBs-Tg小鼠血清中均存在自身抗

5、體，在HBV-Tg小鼠血清中鑒定出8種自身抗體，其中有兩種(Etfa和Dmgdh)是質(zhì)譜鑒定出的在HBV轉(zhuǎn)基因鼠中過(guò)表達(dá)的蛋白。我們進(jìn)一步利用GO分析研究了這些自身反應(yīng)蛋白在細(xì)胞中的定位，發(fā)現(xiàn)8種蛋白中的7種定位于肝細(xì)胞的線粒體中。而HBs轉(zhuǎn)基因小鼠血清中鑒定出4種，其中3種與HBV轉(zhuǎn)基因小鼠相吻合。推廣至臨床樣本中我們同樣發(fā)現(xiàn)HBV感染病人血清中存在自身抗體并成功鑒定出9種，其中3種(ECSH1、ALB和GLUD)與小鼠模型相一致，而