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文檔簡介
1、褐牙鲆(Paralichthys olivacens)屬鰈形目,牙鲆科、牙鲆屬,俗稱比目魚、片口。常棲息泥沙、砂石或巖礁地質(zhì)、水深20~50m和潮流較為通暢的沿岸水域,具潛伏習(xí)性,白天常潛伏在泥沙中不大活動,夜間出來覓食。其自然分布區(qū)主要是中國沿海、朝鮮半島、日本和俄羅斯的亞洲海區(qū),且生長快、個體大、肉質(zhì)細嫩鮮美,是名貴的重要海水養(yǎng)殖品種之一。褐牙鲆為冷溫性底棲魚類,比較適宜溫度較低的水環(huán)境,我國關(guān)于褐牙鲆人工繁殖、養(yǎng)殖及生理方面的研究
2、主要集中在北方地區(qū)。近幾年來,為加快海水養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)調(diào)整,對舟山本地褐牙鲆生殖生理方面的研究逐漸增多,并已初步建立適于舟山褐牙鲆的育苗生產(chǎn)工藝。本試驗即通過建立一種快速而高效的超低溫冷凍保存模式,一方面為舟山褐牙鲆大規(guī)模工廠化苗種繁育提供可靠的參考依據(jù);另一方面也為其種質(zhì)資源保存提供理論基礎(chǔ)。 1. 褐牙鲆精子的生理學(xué)特性及超低溫冷凍保存 褐牙鲆精漿pH值為(7.90±0.26),精子密度為(1.03×1010)/ml,精漿
3、滲透壓為(308.50±7.85)mOsm/kg,K+、Na+在精漿中的濃度分別為(27±3)mmol/A、(71±5)mmol/L,精子壽命(23±2)min。在鹽度為35,pH為8時,精子的活力最高,分別達到(93.33±5.67)%和(89±3.33)%。精子在室溫(25℃)條件下,可存活4d;在低溫(4℃)條件下可以存活7d。以S3液作為稀釋液,16%的DMSO作為抗凍劑,利用快速降溫法對精子進行超低溫冷凍保存,38℃水浴快速解
4、凍,解凍后的精子獲得最高的活力為(84±3.67)%。 此外,通過應(yīng)用計算機輔助精子分析系統(tǒng)(CASA)對超低溫冷凍前后褐牙鲆精子的運動參數(shù)進行了分析,結(jié)果表明:鮮精與凍精的運動精子占總精子數(shù)的百分率(MOT),平均曲線運動速度(VCL),平均直線運動速度(VSL),平均路徑運動速度(VAP)和精子運動路線的曲折程度(LIN)相比,都有顯著性差異(p<0.05),而激活0.5min時,鮮精和凍精的MOT值差異不顯著(p>0.05
5、)。同時超低溫冷凍前后,直線運動、曲線運動、左右擺動和不運動的精子數(shù)目占總精子數(shù)的百分值分別為(24.49+3.87)%、(48.53+4.55)%、(24.72+2.86)%和(2.27±1.22)%,而且隨著激活時間的延長,褐牙鲆精子的運動狀態(tài)發(fā)生改變,直線運動和曲線運動的精子數(shù)目逐漸減少,而不運動和左右擺動的精子數(shù)目逐漸增多。 2. 褐牙鲆精子超微結(jié)構(gòu) 對自然成熟的褐牙鲆精子的超微結(jié)構(gòu)進行了觀察,電鏡顯示,褐牙鲆精
6、子的頭部近似球形,直徑(1.49±0.17)μm,尾部鞭毛較長,達(40.17+0.65)岬。褐牙鲆精子由頭部和尾部(鞭毛)構(gòu)成。頭部的頂端無頂體,頭部的細胞核為圓形,染色質(zhì)致密。精子細胞質(zhì)膜與核膜間有較大間隙,兩者之間分布有許多細胞質(zhì)和少量囊泡。植入窩位于細胞核后端的凹陷處,中心粒復(fù)合體位于植入窩內(nèi)?;w長軸與精子的長軸平行,近端中心粒與基體呈鈍角排列。基體的頭端由電子致密物質(zhì)構(gòu)成,基體的尾端與鞭毛軸絲起始端的的9組外周二聯(lián)微管相連。
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