調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的變化與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病活動度的相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(regulatory B cells，Bregs)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類B細(xì)胞亞群，能分泌各種細(xì)胞因子，它們有利于自身免疫疾病中免疫耐受的維護，并且能抑制過量的炎癥反應(yīng)。本研究主要測定不同疾病活動度類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)病人外周血循環(huán)的兩種調(diào)節(jié)性B細(xì)胞亞型，以及血清中相關(guān)細(xì)胞因子水平，通過分析它們與RA疾病活動度的相關(guān)性，來探索調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在RA疾病中發(fā)揮的作用，進一步

2、理解它們的生物學(xué)功能，也為RA疾病尋找可行的藥物治療靶點。
　　方法:
　　1.浙江省臺州醫(yī)院倫理委員會支持該項研究，所有病人均簽知情同意書。根據(jù)1987年美國風(fēng)濕病學(xué)院標(biāo)準(zhǔn)收集到59例不同疾病活動度的RA患者，同時收集到25例健康個體參與該研究。每個RA患者疾病活動度均根據(jù)28個關(guān)節(jié)疾病活動度得分來評價。并且，記錄每個病人的臨床實驗室標(biāo)志物，包括血沉(ESR)，類風(fēng)濕因子(RF)，所有病人均排除肝，腎疾病和其它炎癥或者自身

3、免疫疾病。同時記錄健康個體有關(guān)實驗室指標(biāo)。根據(jù)疾病活動度將病人分為三組，低活動度組(low activity，LA)，(DAS＜3.2)，中活動組(moderateactivity，MA)(3.2＜DAS＜5.1)，高活動度組(high activity，HA)(DAS＞5.1)。
　　2.所有參與者均采集5ml肝素抗凝靜脈血。分離血清-80℃保存。全血細(xì)胞分類計數(shù)和ESR通過血常規(guī)分析儀(Alifax TEST I)檢測，超敏C

4、反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和RF用生化分析儀(IMMAGE800)測定。
　　3.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測所有參與者血清白介素10(IL-10)，白介素21(IL-21)，顆粒酶B(Granzyme B，GzmB)濃度。比較RA患者與正常對照之間的差異，并分析與RA患者Bregs細(xì)胞，及疾病活動度DAS28之間的關(guān)系。
　　4.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測所有參與者外周血中調(diào)節(jié)性B細(xì)胞CD19+CD5+CD1dhi和CD1

5、9+CD5+GzmB+細(xì)胞的比例，探討分析二者與RA疾病活動度的關(guān)系。分析與分泌的相關(guān)細(xì)胞因子之間的關(guān)系。
　　5.實驗數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析（17.0版），數(shù)據(jù)用均值(mean)與標(biāo)準(zhǔn)誤(standard error，SE)來描述，統(tǒng)計比較采用Mann-Whitney U-tests，兩組之間相關(guān)性分析利用Spearman相關(guān)法，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.為了評價RA患者外周血

6、細(xì)胞因子微環(huán)境，我們測定了RA患者和正常對照組血清IL-10，IL-21，GzmB水平。與正常對照相比較，RA患者血清中IL-10和IL-21的濃度是降低的，（IL-10:4.632±0.380 pg/mL vs.3.563±0.205pg/mL, P=0.0094; IL-21:398.5±25.28 pg/mL vs.320.9±14.61 pg/mL,P=0.0076)，然而GzmB水平與對照組相比沒有不同（P=0.4772）。<

7、br>　　2.RA患者細(xì)胞數(shù)量降低并且與RA疾病活動度負(fù)相關(guān)。我們觀察到與健康對照組(healthy control，HC)(4.208±0.468％)相比，CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞的百分比在HA組(2.742±0.432％)和MA組(3.306±0.418％)是升高的，
　　(PHA=0.0038，PHA=0.0409)。然而，三組RA沒有差異（P＞0.05）。我們分析了CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞數(shù)量和RA患者

8、臨床特征指標(biāo)間的相關(guān)性，CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞數(shù)量與DAS28顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.396，P=0.005），另外，CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞與血清IL-10，ESR，CRP，RF水平無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性（P＞0.05）
　　3.RA患者外周血中CD19+CD5+GzmB+細(xì)胞數(shù)量升高。我們檢測了RA患者組和對照組CD19+CD5+B細(xì)胞亞群GzmB的表達(dá)，與CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞相反，我們觀察到CD19

9、+CD5+GzmB+細(xì)胞百分比升高，（LA:2.467±0.418％，P=0.0328;MA:2.200±0.232％,P=0.0352; HA:2.114±0.212％,P=0.0446; HC:1.632±0.191％)。但是，三組RA患者組沒有顯著差異（P＞0.05）。另外，RA患者中血清IL-21和GzmB濃度呈強正相關(guān)（r=0.4316，P=0.0048）。然而，CD19+CD5+GzmB+細(xì)胞和DAS28得分或血清IL-21

10、水平無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　RA患者血清中IL-10，IL-21濃度較正常人，水平降低，并且，就我們的數(shù)據(jù)分析，二者之間存在微弱的正相關(guān)。但血清GzmB的濃度沒有差異。IL-10具有抗炎作用，提示IL-10的降低可能導(dǎo)致機體免疫抑制功能受損，促進了RA的發(fā)展。IL-21有多種功能，包括促炎與抗炎作用，在RA中的作用還有待闡明。CD19+CD5+CD1dhi細(xì)胞是已被證實的能夠分泌IL-10的Bregs