密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因在兩種昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:提高16型人乳頭瘤病毒(HPV16)L1基因以桿狀病毒為載體，在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)水平，為研制預(yù)防性HPV疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法:根據(jù)昆蟲細(xì)胞密碼子偏性對(duì)野生型HPV16L1基因進(jìn)行改造，全基因合成密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因，利用Bac-To—Bac表達(dá)系統(tǒng)獲得重組桿狀病毒，感染昆蟲細(xì)胞Sf9和HighFive。Westernblot鑒定表達(dá)產(chǎn)物；電鏡下觀察病毒樣顆粒形成。利用ELISA法評(píng)價(jià)HPV16L1基因的優(yōu)化效果

2、，并探討L1蛋白在兩種昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的最佳條件。 結(jié)果:Sf9和HighFive細(xì)胞的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Westernblot檢測，在相對(duì)分子質(zhì)量56kD處均出現(xiàn)HPV16L1的特異性條帶；電鏡下可見病毒樣顆粒在兩種昆蟲細(xì)胞的核內(nèi)形成；ELISA法結(jié)果顯示密碼子優(yōu)化型HPV16L1基因的表達(dá)水平顯著高于野生型(P<0.01)。HighFive細(xì)胞表達(dá)的最佳條件為MOI=10，表達(dá)時(shí)相72h，其L1蛋白表達(dá)量至少比Sf9細(xì)胞高3倍。