密碼子優(yōu)化的HPV16型L2E7融合基因的原核表達(dá)及其蛋白的免疫效果觀察.pdf

1、本文的目的是提高L2E7融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)量，為后期純化打下良好基礎(chǔ)，同時能降低HPV治療性疫苗生產(chǎn)成本。本試驗主要從密碼子偏性等方面來進(jìn)行優(yōu)化從而期望提高L2E7融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá)量，經(jīng)密碼子優(yōu)化后的基因在大腸桿菌中得到高效表達(dá)，目的蛋白占全菌的60％左右。密碼子優(yōu)化后的蛋白進(jìn)行了層析純化。經(jīng)純化后的HPVl6 L2E7蛋白進(jìn)行了體液免疫和細(xì)胞免疫效果的檢測。ELISA結(jié)果顯示免疫組小鼠血清中均檢測到了HPV16 L2和

2、HPV16 E7的抗體，而從免疫組來看，L2E7蛋白+CpG組的效果要好于單獨(dú)蛋白組。ELISPOT結(jié)果顯示無論是E7合成肽庫刺激還是E7<,49-57>表位肽刺激，在分泌IFN-γ的效應(yīng)T細(xì)胞數(shù)檢測中，免疫組小鼠可以檢測到較高的斑點(diǎn)數(shù)。抗腫瘤移植試驗結(jié)果和治療移植瘤實(shí)驗結(jié)果顯示，L2E7蛋白加CpG均能保護(hù)100％小鼠不成瘤，表明HPV16 L2E7蛋白有很好的腫瘤生長抑制效果和抗腫瘤移植效果。這些均表明密碼子優(yōu)化后基因不僅在大腸桿菌