密碼子優(yōu)化的輪狀病毒VP6蛋白在煙草中的高效表達.pdf

1、輪狀病毒(Rotavirus，RV)是引起全世界嬰幼兒和幼齡動物嚴重腹瀉的最重要、最常見的病原。在發(fā)展中國家，每年因RV感染發(fā)生中度和嚴重腹瀉以及死亡的兒童高達1887萬人；在發(fā)達國家，因RV感染造成的經(jīng)濟損失是一個不容忽視的問題。據(jù)估計美國每年就此一項的醫(yī)藥損失高達2億6千萬美元。鑒于RV危害嚴重且無有效的治療手段，世界衛(wèi)生組織(WHO)將RV疫苗列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項目之一。我們對于新型RV疫苗的研究仍在探索之中。 植物生物

2、反應器是一種安全和廉價的生物系統(tǒng)。隨著分子生物學的發(fā)展，特別是植物遺傳工程的快速發(fā)展，人類可以通過自身的意愿設計和改造植物，高效的生產(chǎn)出廉價的人類生產(chǎn)和生活所需要的各種產(chǎn)品。這種植物反應器的概念，尤其是利用植物生產(chǎn)藥用蛋白和工業(yè)化酶類的概念，以及植物直接作為口服疫苗的概念，漸漸受到人們的重視和慢慢被人們廣泛的接受。 本實驗嘗試利用煙草作為生物反應器生產(chǎn)VP6蛋白。將密碼子優(yōu)化的VP6基因克隆到質粒中，構建植物表達載體pBI121

3、-V6(U)。利用農(nóng)桿菌介導法轉化煙草，經(jīng)卡那霉素(Kan)多重篩選，獲得抗性植株，對抗性植株提取DNA進行PCR分析，表明VP6基因已經(jīng)整合到煙草的基因組中。轉基因植株的western blot顯示pBl121-V6(u)的轉基因煙草可以有效的表達VP6蛋白。實驗結果表明，我們所構建的重組輪狀病毒多表位具有一定的免疫原性。本研究為研制重組輪狀病毒抗原表位亞單位疫苗、轉基因植物口服疫苗提供一條新的途徑和方法，具有一定的理論意義和應用前景