白藜蘆醇腹腔注射后在大鼠體內(nèi)的組織分布及其溶劑相關(guān)性.pdf

1、背景:腹腔化療是一種區(qū)域選擇性化療方法。因其對腹腔內(nèi)臟器的選擇性且行之有效、操作簡單，現(xiàn)已廣泛用于結(jié)、直腸癌、肝癌、胃癌和卵巢癌的早期或術(shù)后治療。傳統(tǒng)抗癌藥物在增加患者生存率的同時，其副作用也嚴重影響到患者的生存質(zhì)量。因此，找到具有明顯抗癌效果而又副作用小的腹腔化療藥物對腹腔化療的臨床應(yīng)用意義重大。白藜蘆醇是一種非黃酮多酚類化合物，也被稱為芪三酚。1940年首次從白藜蘆的根中提取出來。現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇還存在于花生、葡萄、桑葚、藜蘆、虎

2、杖、決明子、何首烏、鳳梨、谷類、朝槐等七十多種植物中。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的白藜蘆醇生物學(xué)活性主要包括抗病毒、神經(jīng)保護、抗氧化、心血管的保護、抗炎、植物雌激素、抗腫瘤等作用。在抗腫瘤方面，現(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇對多種高發(fā)性腫瘤有抑制作用，包括淋巴系和髓系腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、卵巢癌和宮頸癌。然而，許多實驗結(jié)果顯示白藜蘆醇體內(nèi)藥物活性并不能達到體外水平，這表明白黎蘆醇的生物利用度

3、低，血藥濃度及各組織器官的藥物含量遠遠低于體外實驗的有效濃度，因而在體內(nèi)不足以發(fā)揮與體外實驗相當(dāng)?shù)乃幚砘钚浴Ｎ墨I提供的實驗方法均為將白藜蘆醇溶于一定比例的乙醇溶液后注射，然而實驗室前期研究顯示，白藜蘆醇以10％乙醇為溶劑長期腹腔注射，藥物會在腹腔內(nèi)蓄積成不規(guī)則白色斑塊，且對卵巢癌治療效果不佳。這提示我們，在動物體內(nèi)長期腹腔注射白藜蘆醇，必須使用適當(dāng)?shù)娜軇?，使其在腹腔?nèi)吸收迅速、完全，才能提高各組織內(nèi)白藜蘆醇的含量，達到治療效果。

4、　　目的:通過白藜蘆醇持續(xù)腹腔給藥分析:1)不同溶劑（10％乙醇和DMSO）對大鼠體內(nèi)各器官藥物分布的影響。2）10％乙醇為溶劑是否可一定程度上起到緩釋的作用。3）通過HE染色方法，對比觀察不同溶劑（10％乙醇和DMSO）給藥組的組織形態(tài)學(xué)變化。通過上述實驗，探究白藜蘆醇腹腔注射合適的溶劑并推斷其安全性。
　　方法:從生物樣品中分離、富集白藜蘆醇，并建立有效的高效液相色譜分析方法檢測其含量。C18色譜柱:5μm，4.6mm×250

5、mm;Nacalai Tesque，Japan。流動相:A相20％乙腈（乙酸調(diào)PH為3.5的水配置），B相80％乙腈（乙酸調(diào)PH為3.5的水配置）。梯度洗脫:0min0％B-12min40％B-20min100％B-28min100％B。檢測波長:303nm。流速:1ml/min。柱溫:30℃。上樣量:15μl。將12只大鼠隨機分為3組:10％乙醇溶劑組1，DMSO溶劑組1，10％乙醇溶劑組2。大鼠稱重后以20mg/kg的劑量腹腔注射白

6、藜蘆醇，每天一次，連續(xù)注射兩周。DMSO溶劑組注射的白藜蘆醇用DMSO溶解，10％乙醇溶劑組1和10％乙醇溶劑組2注射的白藜蘆醇以10％乙醇為溶劑溶解，白藜蘆醇濃度均為10mg/ml。最后一次給藥后一小時，10％乙醇溶劑組1和DMSO溶劑組的大鼠脫頸處死，取心、肝、脾、肺、腎、腸，HPLC檢測其中白藜蘆醇濃度，HE染色觀察其形態(tài)學(xué)變化。10％乙醇溶劑組2的大鼠最后一次給藥后1h觀察白色斑點形成情況并拍照記錄。之后縫合腹腔，肌肉注射青霉素

7、-鏈霉素0.2ml。最后一次給藥后48小時再次打開腹腔拍照記錄，并將心、肝、脾、肺、腎、腸，HPLC檢測其中白藜蘆醇濃度。
　　結(jié)果:1）DMSO溶劑組中心、肝、脾、肺、腎、腸中白藜蘆醇的濃度是10％乙醇溶劑組1的4.17、2.54、5.93、4.23、2.10、1.91倍。2）10％乙醇溶劑組2的四只大鼠，最后一次給藥后1h，腹腔內(nèi)可觀察到不規(guī)則斑塊，48h后消失。3）10％乙醇溶劑組1的組織和DMSO溶劑組的組織形態(tài)沒有發(fā)生形