白藜蘆醇抑制子宮內膜癌的體內實驗研究.pdf

1、目前在抗癌研究中，天然生物制劑治療腫瘤已經成為腫瘤治療領域的最有前景的途徑之一。白藜蘆醇作為一種天然生物制劑抑瘤作用已有很多研究，而白藜蘆醇在子宮內膜癌中如何起作用還未明確。
　　目的：
　　本實驗主要觀察白藜蘆醇和microRNA-181a(miR-181a)對子宮內膜癌裸鼠皮下移植瘤生長的作用。驗證該作用是否與體外實驗中白藜蘆醇和miR-181a對子宮內膜癌細胞作用一致，為臨床治療提供新的思路。
　　方法：

2、　　1、收集2013年至2014年收治南京鼓樓醫(yī)院婦產科的子宮內膜癌患者的內膜癌組織20例（G1期8例，G2期4例、G3期5例，漿液性乳頭狀癌3例）及因非惡性原因行子宮全切除術患者（子宮肌瘤）的正常內膜組織13例，Realtime-PCR及Western blot技術檢測miR-181a及SIRT1在子宮內膜癌及正常內膜組織中的表達情況。
　　2、應用體外擴增培養(yǎng)的Ishikawa細胞株建立子宮內膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。待腫瘤體積

3、達到50mm3（約造模后2周）后，隨機將30只荷瘤裸鼠分為6組（每組5只），分別為A組（PBS瘤內注射，10％羥甲基纖維素CMC灌胃）、B組(PBS瘤內注射，白藜蘆醇灌胃)、C組(Ad-miR-181a瘤內注射，10％CMC灌胃)、D組(Ad-miR-181a瘤內注射，白藜蘆醇灌胃)、E組（空載腺病毒laz-miR-181a瘤內注射，10％CMC灌胃）、F組（laz-miR-181a瘤內注射，白藜蘆醇灌胃）。具體劑量:瘤內注射1x PB

4、S(10ul·只-1)，Ad-miR-181a（2*10^8·只-1，約10ul·只-1）， laz-miR-181a（2*10^8·只-1，約10ul·只-1），灌胃10％ CMC(0.1ml·只-1·天-1)，白藜蘆醇(50.0mg·kg-1·天-1)，成瘤后，腺病毒瘤內注射每3天一次，共3次，白藜蘆醇每天灌胃，1個月后于最后一次治療后2天處死所有裸鼠。治療過程中，觀察統(tǒng)計移植瘤體積變化，計算抑瘤率;實時定量PCR(real tim

5、e quantitative Polymerase Chain Reaction, real-time PCR)和WesternBlotting方法檢測裸鼠移植瘤組織中miR-181a及SIRT1的mRNA和蛋白表達。
　　結果：
　　1.miR-181a mRNA在腫瘤組織中表達高于正常內膜組織，且與惡性程度呈正相關， SIRT1 mRNA及蛋白表達在腫瘤組織中均低于正常內膜組織。P-STAT3、AC-STAT3蛋白在腫瘤

6、組織中表達高于正常內膜組織，而STAT3無明顯變化。
　　2.成瘤到50mm3大概需要13-16天。白藜蘆醇及Ad-miR-181a干預的腫瘤生長明顯發(fā)生變化。與A組相比，B組、F組腫瘤體積明顯縮小(p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，C組腫瘤體積明顯增大(p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，D組體積增大(p=0.023)，差異有統(tǒng)計學意義，E組體積稍增大(p=0.252)，差異無統(tǒng)計學意義，D組較C組、F組較E組與相比，腫瘤縮小

7、(p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，F(xiàn)組較B組，腫瘤體積稍增大(p=0.195)，差異無統(tǒng)計學意義。miR-181a mRNA表達水平B組較A組miR-181a mRNA表達水平明顯降低(p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，F(xiàn)組較A組降低(p=0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，C組、D組較A組miR-181amRNA表達水平明顯上升(p＜0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，E組較A組(p=0.092)差異無統(tǒng)計學意義;D組較C組、F組較E組

8、miR-181a mRNA表達水平明顯降低(p=0.001)，差異有統(tǒng)計學意義，B組較F組(p=0.076)，差異無統(tǒng)計學意義;SIRT1蛋白相對表達水平上B組、D組、F組較A組蛋白相對表達水平明顯升高(p＜0.001)，C組較A組SIRT1蛋白相對表達水平明顯下降(p=0.03），差異有統(tǒng)計學意義，E組無明顯改變(p=0.926)，差異無統(tǒng)計學意義，D組較C組、F組較E組miR-181a mRNA表達水平明顯降低(p＜0.001)，差

9、異有統(tǒng)計學意義，B組較F組(p=0.911)，差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　本研究表明miR-181a mRNA在子宮內膜癌組織中高表達，且與惡性程度呈正相關，SIRT1 mRNA及蛋白在腫瘤組織中低表達。過表達miR-181a可有效沉默SIRT1的表達，顯著促進人子宮內膜癌裸鼠移植瘤生長，并降低腫瘤組織中SIRT1基因的表達。而白藜蘆醇對人子宮內膜癌ishikawa細胞裸鼠移植瘤有明顯的抑制作用，并在一定程度上逆轉m