白藜蘆醇在砷誘導大鼠肝氧化應激中的作用研究.pdf

1、砷是一種廣泛存在于環(huán)境中的污染物和致癌物。然而，自古以來人們恰恰利用砷的毒性來治療疾病和防治蟲害。同時，砒霜(Arsenic trioxide，As2O3)也被認為是早幼粒細胞白血病(Acute Promyelocytic Leukemia，APL)的良藥，然而在使用As2O3治療APL的過程中，會出現(xiàn)明顯的肝毒性。因此，如何有效的降低砷暴露人群的砷毒性以及治療過程中的毒副作用成為了國內外研究的熱點課題。目前，關于砷的毒性機制國內外研究

2、結果顯示:誘導自由基(Reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生在毒性研究中處于核心位置，因其伴隨毒性的整個過程。而大量的研究資料表明，抗氧化劑的使用可以有效地降低過多自由基的產(chǎn)生。
　　白藜蘆醇(Resveratrol，RES)化學名稱為(E)-3，5，4-三羥基二苯乙烯，屬于非黃酮類多酚化合物。在植物中，RES會在微生物感染、過度紫外線照射和疾病感染時產(chǎn)生，因此又屬于植物素。大量的研究證實RES具有抗炎、自

3、由基清除、心血管保護、抗腫瘤和抗衰老等多種生物學活性。因此，本研究運用細胞生物學和分子生物學技術，通過體內（正常健康大鼠、砷暴露大鼠、RES處理大鼠及同時處理大鼠）和體外（原代肝細胞、砷暴露肝細胞、RES添加處理肝細胞及同時處理肝細胞）兩條途徑，重點評估砷暴露后大鼠肝臟的氧化應激、砷蓄積和肝細胞凋亡等情況，以及RES對其的影響。以8周Wistar大鼠為研究對象，通過分別隔日尾靜脈注射8 mg/kg RES和3 mg/kg As2O3，且

4、聯(lián)合給藥組RES先于As2O31h注射，共4次，持續(xù)到第8天，建立體內砷暴露模型。我們發(fā)現(xiàn):砷暴露大鼠的血液中出現(xiàn)以丙氨酸氨基轉移酶、谷丙轉氨酶和乳酸脫氫酶明顯升高的肝損傷和ROS（750.29±81.33 Unites/mL）、脂質物氧化物丙二醛（4.9±0.67μmol/L）過高濃度和超氧化物歧化酶(7.42±1.14Unites/mL)、谷胱甘肽過氧化物酶(215.93±35.19 Unites/L)、過氧化氫酶(3.66±0.3

5、2Unites/mL)過低濃度，以這些為主要標志的氧化應激性損傷以及典型的中毒性病理損傷和高出正常組約7倍的砷蓄積;然而，預防性給予RES的大鼠肝組織氧化性和病理性損傷情況均得到緩解且砷的蓄積量也顯著降低(p＜0.05)。為了進一步探索As2O3誘導肝細胞氧化應激是否能引發(fā)凋亡以及明確凋亡的路徑，我們又建立了體外細胞模型。本試驗采用原位膠原二步灌流法獲取大鼠原代肝細胞，通過分別添加As2O3和RES建立大鼠原代肝細胞試驗模型。試驗結果表

6、明，As2O3添加影響了原代肝細胞的貼壁生長、造成了肝細胞明顯的病理性損傷和誘導了肝細胞的氧化應激，同時，肝細胞的線粒體凋亡路徑被激活，主要表現(xiàn)為以Fax/TNF為受體的凋亡在砷暴露前后以及給予RES并無明顯性差異，而以Bcl-2和Bax為線粒體的凋亡在砷暴露后均顯著性升高，且Bcl-2/Bax的比率明顯下降，但Caspase-3的基因表達差異性卻不顯著。鑒于Caspase-3激活的凋亡是受其活性蛋白調控，又對其活性進行了檢測。與正?？?/p>

7、白組相比，高砷環(huán)境下Caspase-3的活性提高了近10倍，而提前RES處理其活性可減緩20％的升高。在我們的整個試驗過程中，單獨處理RES對肝組織和肝細胞均無明顯可見差異。綜上所述:給予低劑量的RES可以有效地降低As2O3誘導肝臟氧化性損傷，肝細胞凋亡和砷蓄積，從而降低了肝臟的病理性損傷，同時，RES也可以降低As2O3通過Bcl-2/Bax線粒體路徑誘導的凋亡。由此可見預處理的RES降低了以藥物砷對正常健康大鼠誘導產(chǎn)生的氧化應激、