類泛素肽影響人8型皰疹病毒復制與轉錄激活蛋白的活性.pdf

1、新發(fā)現(xiàn)的人類8型皰疹病毒(HHV-8)是復雜的DNA病毒，可導致卡波西肉瘤及多種腫瘤。由ORF50基因編碼的復制與轉錄激活蛋白(RTA)的表達為病毒重激活所必需，并足以完成HHV-8從潛伏態(tài)到裂解態(tài)的轉換。RTA能夠與ORF57啟動子中的RTA應答元件結合，激活ORF57基因的表達，這是使病毒由潛伏態(tài)轉換為裂解狀態(tài)的關鍵一步。RTA的活性受多種因素的影響，如受蛋白相互作用的影響或翻譯后修飾的影響。類泛素肽(SUMO)作為新發(fā)現(xiàn)的蛋白修飾

2、物，可調(diào)節(jié)靶蛋白的活性。已有報道指出SUMO可影響與HHV-8 RTA同源的Epstein-Barr病毒RTA的轉錄激活能力，而磷酸化修飾也能調(diào)節(jié)HHV-8RTA的活性，但SUMO是否影響RTA的反式激活能力目前尚未知。 本文利用SUMO基因構建成真核表達質(zhì)粒，并與RTA的表達質(zhì)粒和ORF57報告質(zhì)粒共轉染293T細胞，發(fā)現(xiàn)SUMO能抑制RTA對ORF57啟動子的激活功能，且抑制作用呈現(xiàn)出劑量依賴效應。與SUMO G97A突變體

3、相比，SUMO的抑制效果遠遠優(yōu)于其突變體。將催化SUMO修飾的Ubc9真核表達質(zhì)粒與RTA表達質(zhì)粒和ORF57報告質(zhì)粒共轉染細胞，發(fā)現(xiàn)Ubc9同樣具有抑制RTA對ORF57的轉錄激活活性的功能，并表現(xiàn)出劑量依賴性。當SUMO和Ubc9共表達時，兩者可協(xié)同作用，進一步加強對RTA活性的抑制。借助蛋白質(zhì)印跡實驗技術發(fā)現(xiàn)RTA的表達不受SUMO和Ubc9的影響，表明SUMO和Ubc9對RTA反式激活能力的下調(diào)并不是由于RTA蛋白表達水平的改變