IEX-1基因高甲基化在卵巢癌進(jìn)展中的作用.pdf

1、背景和目的：
　　卵巢惡性腫瘤是婦科三大惡性腫瘤之一，卵巢癌在全球婦女癌癥死亡率中位居第一，嚴(yán)重威脅著人們的生命和健康，而且發(fā)病率居高不下，尤其是在發(fā)展中國家。卵巢癌的早期診斷及治療成為人類亟待解決的難題。基因的表達(dá)調(diào)控主要通過遺傳學(xué)(genetics)和表觀遺傳學(xué)(epigenetics)兩種機(jī)制實(shí)現(xiàn)。遺傳學(xué)改變是涉及核苷酸序列改變的機(jī)制，但是就現(xiàn)在的科學(xué)技術(shù)水平來說也只是能解釋腫瘤發(fā)生機(jī)制中的一部分原因，表觀遺傳學(xué)機(jī)制是一種不

2、涉及DNA序列變化的可遺傳的基因表達(dá)方式的改變，目前認(rèn)為表觀遺傳學(xué)是較遺傳學(xué)更為常見的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制，許多具有重要功能的基因是通過表觀遺傳學(xué)機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。DNA甲基化表觀遺傳的主要方式，是研究得最深入的作用方式，與抑制基因的表達(dá)有關(guān)，其在腫瘤發(fā)生中的作用是近年來的研究熱點(diǎn)。即刻早期反應(yīng)基因（immediate early response gene X-1,IEX-1）在細(xì)胞凋亡、增殖、分化中起著關(guān)鍵的作用，在人類的多種腫

3、瘤中已經(jīng)證實(shí)，根據(jù)腫瘤類型和發(fā)展階段的不同，IEX-1的異常表達(dá)和腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：卵巢癌的發(fā)生發(fā)展與IEX-1的低表達(dá)有關(guān)。哺乳動(dòng)物包括人類體內(nèi)的DNA甲基化90％發(fā)生在二核苷酸胞嘧啶(CpG)序列，而IEX-1基因啟動(dòng)子區(qū)含有豐富的易甲基化的CpG島。因此認(rèn)為，IEX-1基因DNA甲基化可能與卵巢癌組織中IEX-1基因功能失活有關(guān)。本研究將對43例卵巢癌組織和3株卵巢癌細(xì)胞，采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(me

4、thylation-specific pCR,MsP)技術(shù)、RT-PCR技術(shù)和免疫組化法檢測IEX-1基因的DNA甲基化程度和其mRNA及蛋白的表達(dá)，探討不同病理類型的卵巢癌組織中IEX-1基因的DNA甲基化程度及其與IEX-1 mRNA和蛋白表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：
　　1.采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(methylation-specific pCR,MsP)技術(shù)檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細(xì)胞中IEX-1基因的DNA甲

5、基化程度；
　　2.采用RT-PCR技術(shù)檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細(xì)胞中IEX-1基因mRNA的表達(dá)情況；
　　3.采用免疫組化法檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細(xì)胞中IEX-1基因蛋白的表達(dá)；
　　4.采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。IEX-1基因的DNA甲基化程度及其mRNA和蛋白表達(dá)水平分別在不同病理類型和手術(shù)病理分期間的比較，采用Fisher精確概率法檢驗(yàn)；IEX-1基因的DNA甲基化程度與其mRNA和蛋白

6、表達(dá)水平的關(guān)系，采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.卵巢癌組織中IEX-1基因甲基化的陽性率明顯高于對照組(44.2％;28.6％;均P　　2.卵巢癌組織中IEX-1基因mRNA表達(dá)明顯低于對照組(30.2％;81.0％;P　　3.卵巢癌組織中IEX-1基因甲基化陽性組