HMGB1在卵巢癌血管生成中的作用研究.pdf

1、侵襲和轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者死亡的重要因素,血管新生為侵襲和轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ),所以在此過程中起關(guān)鍵作用,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前已知最強的血管通透劑,它能導(dǎo)致癌性腹水或腫瘤間質(zhì)水腫,而且導(dǎo)致血漿、纖維等蛋白向血管外滲出,導(dǎo)致細胞外基質(zhì)的改變,從而促進血管的形成,是重要的與惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和腹水形成相關(guān)的生長因子。
　　高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白由壞死細胞釋放,誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),促進組織修復(fù)和血管生成。因HM

2、GB1可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞生長、遷移及芽發(fā)而被定義為促血管生成因子。HMGB1誘導(dǎo)的細胞遷移要求激活經(jīng)典和非經(jīng)典的NF-κB通路,這樣會導(dǎo)致CXCL12基因的轉(zhuǎn)錄。HMGB1還可以保護CXCL12免受降解,誘導(dǎo)額外的CXCL12的分泌。
　　CXCL12在血管新生中起重要作用,CXCL12上調(diào) VEGF表達,而 VEGF上調(diào)CXCL12表達,CXCR4-CXCL12和VEGF在促進血管產(chǎn)生過程中有協(xié)同作用。HMGB1和CXCL12形

3、成的異元復(fù)合體,僅通過CXCR4信號通路發(fā)揮炎癥細胞募集的作用。
　　因此,我們擬通過檢測HMGB1對卵巢癌血管內(nèi)皮生長因子VEGF和趨化因子12(CXCL12)表達的影響及機制來了解是否對卵巢癌的血管新生有影響,初步探討卵巢癌中血管新生的機制。
　　第一部分卵巢癌組織中HMGB1,CXCL12,VEGF的表達。
　　目的:
　　檢測卵巢癌組織中HMGB1,CXCL12,VEGF的表達
　　方法:
　

4、　選取54例已確診為上皮性卵巢癌患者,對照組為同期因其它婦科疾病行手術(shù)切除正常卵巢組織標(biāo)本20例,通過免疫組化方法,檢測卵巢癌組織中HMGB1、CXCL12、VEGF的表達情況。
　　結(jié)果:
　　HMGB1在癌細胞、間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)和細胞核中均有淡黃色至棕褐色顆粒;CXCL12在癌細胞和間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)呈淡黃色至棕褐色;VEGF在癌細胞及間質(zhì)細胞的細胞質(zhì)呈淡黃色至棕黃色。
　　結(jié)論:HMGB1、VEGF和CXCL12在

5、卵巢癌組織中均有表達,且與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有關(guān)。
　　第二部分 SKOV3,HUVECs細胞中HMGB1表達
　　目的:
　　檢測HMGB1在SKOV3,HUVECs細胞中具體表達情況。
　　方法:
　　分別提取SKOV3,HUVECs細胞總蛋白、胞漿及胞核蛋白,后利用western blot檢測HMGB1在兩者細胞中的表達情況。
　　結(jié)果:
　　HMGB1不僅在SKOV3細胞有蛋白表達,在HUVE

6、Cs細胞中也有蛋白表達,但在SKOV3中蛋白表達高于HUVECs細胞中,HMGB1在SKOV3細胞胞漿的表達顯著高于HUVECs細胞胞漿表達(P=0.009)胞核的表達顯著高于HUVECs細胞胞核表達(P=0.000),SKOV3胞核中HMGB1蛋白的表達顯著高于其胞漿( P=0.000)。HUVECs胞核中 HMGB1蛋白的表達顯著高于其胞漿表達(P=0.026)。
　　結(jié)論:
　　MGB1在SKOV3,HUVECs細胞中

7、均有表達,可能與HMGB1所處狀態(tài)的不同有關(guān)。
　　第三部分 HMGB1表達變化后對SKOV3血管生成的影響及作用機制研究
　　目的:
　　探討HMGB1在SKOV3血管生成中的作用及其機制
　　方法:
　　將構(gòu)建HMGB1真核表達質(zhì)粒和人工合成針對HMGB1基因的siRNA分別轉(zhuǎn)染SKOV3細胞,運用Western blot檢測轉(zhuǎn)染前后HMGB1,CXCL12的表達變化,利用流式細胞術(shù)檢測SKOV3的凋亡