補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)大鼠肺纖維化的治療作用及其對(duì)TGF‐β表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　肺纖維化（Pulmonary Fibrosis，PF）以纖維細(xì)胞增生和肺泡間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為主要病理學(xué)特征，并最終導(dǎo)致間質(zhì)性肺纖維化而喪失呼吸功能，臨床上主要表現(xiàn)為干咳和運(yùn)動(dòng)性呼吸困難等癥狀。隨著病情的不斷進(jìn)展，最終導(dǎo)致患者呼吸功能衰竭而死亡。近年來(lái)，肺纖維化的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，好發(fā)于中老年人群，平均發(fā)病年齡為66歲，而且其致死率相當(dāng)高，從確診到死亡的平均時(shí)間為3～5年。目前，肺纖維化已成為世界范圍內(nèi)的難治性疾病

2、，故對(duì)其防治研究顯得尤為重要。
　　該病的發(fā)病與多種因素相關(guān)，但其具體的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分明確。無(wú)機(jī)粉塵、有害氣體、某些藥物和自身性疾病均能引起肺纖維化。有研究表明，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（Tumour necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）等各種細(xì)胞因子是導(dǎo)致肺纖維化的主要原因。促纖維化的細(xì)

3、胞因子和抗纖維化的細(xì)胞因子相互協(xié)調(diào)和相互拮抗，最終決定了肺組織的損傷和修復(fù)。研究發(fā)現(xiàn)，在各種因素引起的肺纖維化中均發(fā)現(xiàn)TGF-β的含量增高，TGF-β在肺纖維化的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，它能夠促使肺成纖維細(xì)胞的增殖和分化，是導(dǎo)致肺纖維化的關(guān)鍵性細(xì)胞因子。
　　中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常見(jiàn)關(guān)于“肺痿”、“咳嗽”、“肺脹”、“喘證”和“痰飲”等類(lèi)似肺纖維化的記載。病因多與外邪侵襲、飲食不當(dāng)、情志失調(diào)、年邁體虛有關(guān)。肺腎虧虛是導(dǎo)致該病的基礎(chǔ)。肺主氣

4、，肺氣虧虛則令氣失所主。肺病虛損，病久及腎，腎為氣之根，腎虛則氣虛，氣不歸元，腎不納氣，則喘促。肺助心主治節(jié)而行血，若肺氣不足，則血瘀。綜上所述，我們認(rèn)為氣虛血瘀是導(dǎo)致肺纖維化的主要病機(jī)，并貫穿整個(gè)發(fā)病過(guò)程，因此益氣活血是治療肺纖維化的基本方法。補(bǔ)陽(yáng)還五湯是清代名醫(yī)王清任創(chuàng)立的經(jīng)典方劑，該方旨在益氣活血，組方為生黃芪、當(dāng)歸、川芎、桃仁、赤芍、紅花和地龍組成。方中黃芪性味甘、微溫，歸肺、脾、肝、腎經(jīng)，具有益衛(wèi)固表、補(bǔ)氣升陽(yáng)之功效，常用于肺

5、氣虛證。現(xiàn)代藥理表明黃芪可以增強(qiáng)免疫能力，促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞的再生和生長(zhǎng)，具有保護(hù)肺、肝臟和腎臟的作用。當(dāng)歸性味甘、辛、溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補(bǔ)血、活血、調(diào)經(jīng)、止痛之功效，主血虛諸證?，F(xiàn)代藥理研究表明，當(dāng)歸有抗自由基作用，能明顯抑制炎性損傷。川芎、桃仁、赤芍、紅花有助于臣藥當(dāng)歸尾活血化瘀的作用。地龍通經(jīng)活絡(luò)，化痰平喘。現(xiàn)代藥理研究表明，這些藥物均能夠有效改善肺泡炎的程度，并延緩肺纖維化的進(jìn)程。
　　本研究選用博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化大鼠為

6、模型，探討益氣活血法代表方劑補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)大鼠肺纖維化的治療作用及其對(duì)TGF-β表達(dá)的影響。
　　方法：
　　采用博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化，復(fù)制大鼠肺纖維化模型。將100只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、醋酸潑尼松龍組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯A組和B組，每組各20只。于造模后的第2d開(kāi)始，每日灌胃相應(yīng)的藥物，對(duì)照組和模型組以等量的生理鹽水代替。于造模后的第1周、2周和3周，分3次處死，每組每次4只。觀察各組大鼠死亡、體重、飲食、活動(dòng)和精神

7、狀態(tài)等一般情況；提取完整肺組織并稱(chēng)重，以計(jì)算大鼠肺系數(shù)；提取肺組織行HE和Masson染色，以觀察大鼠肺組織病理學(xué)特點(diǎn)；測(cè)定大鼠肺組織羥脯氨酸含量；采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定大鼠TGF-β蛋白的表達(dá)；采用RT-PCR法檢測(cè)大鼠TGF-βmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠一般情況
　　對(duì)照組大鼠飲食、活動(dòng)均正常，皮毛順滑，精神狀態(tài)佳，死亡1只。模型組大鼠體重明顯下降，精神萎靡，偶見(jiàn)血尿和口鼻出血，死亡8只。醋酸潑尼松

8、龍組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯A組和B組分別死亡6只、4只和3只。模型組大鼠的死亡率明顯大于對(duì)照組（P＜0.05）；醋酸潑尼松龍組、A組和B組大鼠的死亡率與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2、大鼠體重和肺系數(shù)
　　模型組大鼠的體重明顯低于對(duì)照組（P＜0.01），且肺系數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，醋酸潑尼松龍組、A組和B組可不同程度增加大鼠體重（P＜0.05）
　　并降低肺系數(shù)（P＜0.05）。
　　

9、3、大鼠肺組織病理學(xué)觀察
　　HE和Masson染色觀察結(jié)果表明：模型組大鼠肺泡炎、肺纖維的病理學(xué)評(píng)分均顯著高于同一時(shí)期的對(duì)照組（P＜0.01）；補(bǔ)陽(yáng)還五湯A組和B組大鼠肺泡炎、肺纖維的病理學(xué)評(píng)分病理學(xué)積分低于同期模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯能夠減輕博萊霉素所致的大鼠肺纖維化。
　　4、大鼠肺組織羥脯氨酸含量
　　各組大鼠羥脯氨酸的含量均隨著時(shí)間的推移而升高。造模后1周，5組大鼠羥脯氨酸含量

10、無(wú)明顯差異（P＞0.05）；造模后2周、3周，模型組大鼠羥脯氨酸含量顯著高于同期對(duì)照組（P＜0.05），醋酸潑尼松龍龍組、補(bǔ)陽(yáng)還五湯A組和B組大鼠羥脯氨酸含量明顯低于同期模型組（P＜0.05）。說(shuō)明醋酸潑尼松龍龍組和補(bǔ)陽(yáng)還五湯A、B組大鼠肺泡炎和肺纖維化程度較模型組輕，表明補(bǔ)陽(yáng)還五湯能夠減輕博萊霉素所致的大鼠肺纖維化。
　　5、大鼠TGF-β蛋白表達(dá)
　　免疫組織化學(xué)結(jié)果表明：除正常對(duì)照組外，TGF-β蛋白在各組大鼠中的陽(yáng)性

11、表達(dá)隨著時(shí)間的推移而增高；TGF-β蛋白在模型組大鼠中的陽(yáng)性表達(dá)顯著高于同期對(duì)照組（P＜0.01）；TGF-β蛋白在補(bǔ)陽(yáng)還五湯A組和B組大鼠中的陽(yáng)性表達(dá)較同期模型組明顯降低（P＜0.05）。
　　6、大鼠TGF-βmRNA表達(dá)
　　RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與同期對(duì)照組相比，模型組大鼠肺組織TGF-βmRNA的表達(dá)顯著升高（P＜0.01）；TGF-βmRNA在補(bǔ)陽(yáng)還五湯 A組和B組大鼠中的表達(dá)較同期模型組明顯下調(diào)（P＜0.0