補陽還五湯對大鼠肺纖維化的治療作用及其對TGF‐β表達的影響.pdf

1、目的：
　　肺纖維化（Pulmonary Fibrosis，PF）以纖維細胞增生和肺泡間質(zhì)炎性細胞浸潤為主要病理學特征，并最終導致間質(zhì)性肺纖維化而喪失呼吸功能，臨床上主要表現(xiàn)為干咳和運動性呼吸困難等癥狀。隨著病情的不斷進展，最終導致患者呼吸功能衰竭而死亡。近年來，肺纖維化的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，好發(fā)于中老年人群，平均發(fā)病年齡為66歲，而且其致死率相當高，從確診到死亡的平均時間為3～5年。目前，肺纖維化已成為世界范圍內(nèi)的難治性疾病

2、，故對其防治研究顯得尤為重要。
　　該病的發(fā)病與多種因素相關(guān)，但其具體的發(fā)病機制目前尚不十分明確。無機粉塵、有害氣體、某些藥物和自身性疾病均能引起肺纖維化。有研究表明，轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（Tumour necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）等各種細胞因子是導致肺纖維化的主要原因。促纖維化的細

3、胞因子和抗纖維化的細胞因子相互協(xié)調(diào)和相互拮抗，最終決定了肺組織的損傷和修復。研究發(fā)現(xiàn)，在各種因素引起的肺纖維化中均發(fā)現(xiàn)TGF-β的含量增高，TGF-β在肺纖維化的過程中發(fā)揮著重要作用，它能夠促使肺成纖維細胞的增殖和分化，是導致肺纖維化的關(guān)鍵性細胞因子。
　　中國傳統(tǒng)醫(yī)學中常見關(guān)于“肺痿”、“咳嗽”、“肺脹”、“喘證”和“痰飲”等類似肺纖維化的記載。病因多與外邪侵襲、飲食不當、情志失調(diào)、年邁體虛有關(guān)。肺腎虧虛是導致該病的基礎(chǔ)。肺主氣

4、，肺氣虧虛則令氣失所主。肺病虛損，病久及腎，腎為氣之根，腎虛則氣虛，氣不歸元，腎不納氣，則喘促。肺助心主治節(jié)而行血，若肺氣不足，則血瘀。綜上所述，我們認為氣虛血瘀是導致肺纖維化的主要病機，并貫穿整個發(fā)病過程，因此益氣活血是治療肺纖維化的基本方法。補陽還五湯是清代名醫(yī)王清任創(chuàng)立的經(jīng)典方劑，該方旨在益氣活血，組方為生黃芪、當歸、川芎、桃仁、赤芍、紅花和地龍組成。方中黃芪性味甘、微溫，歸肺、脾、肝、腎經(jīng)，具有益衛(wèi)固表、補氣升陽之功效，常用于肺

5、氣虛證?，F(xiàn)代藥理表明黃芪可以增強免疫能力，促進機體細胞的再生和生長，具有保護肺、肝臟和腎臟的作用。當歸性味甘、辛、溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補血、活血、調(diào)經(jīng)、止痛之功效，主血虛諸證?，F(xiàn)代藥理研究表明，當歸有抗自由基作用，能明顯抑制炎性損傷。川芎、桃仁、赤芍、紅花有助于臣藥當歸尾活血化瘀的作用。地龍通經(jīng)活絡(luò)，化痰平喘?，F(xiàn)代藥理研究表明，這些藥物均能夠有效改善肺泡炎的程度，并延緩肺纖維化的進程。
　　本研究選用博萊霉素誘導肺纖維化大鼠為

6、模型，探討益氣活血法代表方劑補陽還五湯對大鼠肺纖維化的治療作用及其對TGF-β表達的影響。
　　方法：
　　采用博萊霉素誘導大鼠肺纖維化，復制大鼠肺纖維化模型。將100只SD大鼠隨機分為對照組、模型組、醋酸潑尼松龍組、補陽還五湯A組和B組，每組各20只。于造模后的第2d開始，每日灌胃相應(yīng)的藥物，對照組和模型組以等量的生理鹽水代替。于造模后的第1周、2周和3周，分3次處死，每組每次4只。觀察各組大鼠死亡、體重、飲食、活動和精神

7、狀態(tài)等一般情況；提取完整肺組織并稱重，以計算大鼠肺系數(shù)；提取肺組織行HE和Masson染色，以觀察大鼠肺組織病理學特點；測定大鼠肺組織羥脯氨酸含量；采用免疫組織化學法測定大鼠TGF-β蛋白的表達；采用RT-PCR法檢測大鼠TGF-βmRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1、大鼠一般情況
　　對照組大鼠飲食、活動均正常，皮毛順滑，精神狀態(tài)佳，死亡1只。模型組大鼠體重明顯下降，精神萎靡，偶見血尿和口鼻出血，死亡8只。醋酸潑尼松

8、龍組、補陽還五湯A組和B組分別死亡6只、4只和3只。模型組大鼠的死亡率明顯大于對照組（P＜0.05）；醋酸潑尼松龍組、A組和B組大鼠的死亡率與對照組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　2、大鼠體重和肺系數(shù)
　　模型組大鼠的體重明顯低于對照組（P＜0.01），且肺系數(shù)顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，醋酸潑尼松龍組、A組和B組可不同程度增加大鼠體重（P＜0.05）
　　并降低肺系數(shù)（P＜0.05）。
　　

9、3、大鼠肺組織病理學觀察
　　HE和Masson染色觀察結(jié)果表明：模型組大鼠肺泡炎、肺纖維的病理學評分均顯著高于同一時期的對照組（P＜0.01）；補陽還五湯A組和B組大鼠肺泡炎、肺纖維的病理學評分病理學積分低于同期模型組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），表明補陽還五湯能夠減輕博萊霉素所致的大鼠肺纖維化。
　　4、大鼠肺組織羥脯氨酸含量
　　各組大鼠羥脯氨酸的含量均隨著時間的推移而升高。造模后1周，5組大鼠羥脯氨酸含量

10、無明顯差異（P＞0.05）；造模后2周、3周，模型組大鼠羥脯氨酸含量顯著高于同期對照組（P＜0.05），醋酸潑尼松龍龍組、補陽還五湯A組和B組大鼠羥脯氨酸含量明顯低于同期模型組（P＜0.05）。說明醋酸潑尼松龍龍組和補陽還五湯A、B組大鼠肺泡炎和肺纖維化程度較模型組輕，表明補陽還五湯能夠減輕博萊霉素所致的大鼠肺纖維化。
　　5、大鼠TGF-β蛋白表達
　　免疫組織化學結(jié)果表明：除正常對照組外，TGF-β蛋白在各組大鼠中的陽性

11、表達隨著時間的推移而增高；TGF-β蛋白在模型組大鼠中的陽性表達顯著高于同期對照組（P＜0.01）；TGF-β蛋白在補陽還五湯A組和B組大鼠中的陽性表達較同期模型組明顯降低（P＜0.05）。
　　6、大鼠TGF-βmRNA表達
　　RT-PCR實驗結(jié)果顯示：與同期對照組相比，模型組大鼠肺組織TGF-βmRNA的表達顯著升高（P＜0.01）；TGF-βmRNA在補陽還五湯 A組和B組大鼠中的表達較同期模型組明顯下調(diào)（P＜0.0