大鼠皮膚切創(chuàng)后E-選擇素表達及死后穩(wěn)定性研究.pdf

1、研究背景及目的：皮膚作為人體最大的器官，與外界直接接觸，對機體具有重要的屏障和保護作用，其最易遭受機械性損傷.在法醫(yī)學實踐中，皮膚損傷時間的推斷常是法醫(yī)工作者需要解決的關鍵問題。正因為如此，關于皮膚損傷時間推斷方面的研究，一直以來是國內外法醫(yī)病理學者的研究熱點問題之一。E-選擇素是細胞粘附分子（adhesion molecule，AM）中選擇素家族（selectin family，SF）成員之一。在體內分布非常局限，主要由毛細血管、后微

2、靜脈的內皮細胞分泌，其胞內無儲存。它只在外傷、炎癥等刺激后在血管內皮細胞表面表達，且具有特異性。E-選擇素產生后，參與記憶T淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞的聚集，以及內皮細胞增殖、遷移、管狀形成和毛細血管的生成，但最主要是介導血液中中性粒細胞粘附。E-選擇素參與損傷早期修復作用，目前國內外對E-選擇素的研究多側重于臨床方面，而對于它在法醫(yī)學領域方面對皮膚損傷后不同時間的表達變化及死后穩(wěn)定性的研究甚少。尤其是國內對E-選擇

3、素在皮膚機械性損傷修復時間的推斷方面幾乎未見報道。本研究通過建立大鼠皮膚切創(chuàng)損傷模型，運用免疫組化技術及其陽性細胞計數(shù)法對損傷組織進行E-選擇素的檢測與分析，探討在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中其表達的時序性變化規(guī)律，以及死后穩(wěn)定性狀況，有可能為法醫(yī)病理學皮膚損傷時間的推斷，鑒別生前傷和死后傷提供一個新的理論依據。 方法：采用完全隨機分組方法，分為實驗組和對照組。實驗組又分為生前造創(chuàng)組、死后造創(chuàng)組、死后穩(wěn)定性-20℃和25℃組。根據造創(chuàng)后處

4、死時間不同，將實驗大鼠隨機分為傷后30min、1h、2h、3h、5h、7h、9h、12h、1d、3d、5d、7d共12亞組；死后造創(chuàng)組分為0.5h，1h，3h共3亞組；另設一組為正常對照組，即未造創(chuàng)組。生前造創(chuàng)組在大鼠頭部制做全層切創(chuàng)，在預定時間分別頸椎脫臼法處死后即刻取材；死后造創(chuàng)組于處死大鼠后在預定時間造創(chuàng)取材。死后穩(wěn)定性組中將大鼠造創(chuàng)后于ld將它們頸椎脫臼法處死。隨機分為14亞組，其中9亞組置于-20℃環(huán)境中，于6h、12h和1d

5、、2d、3d、4d、5d、6d、7d取材；另5亞置于25℃環(huán)境中，于6h、12h和1d、2d、3d取材。取材皮膚組織用多聚甲醛-PBS液中固定后，石蠟包埋切片，進行常規(guī)HE染色光鏡觀察；采用免疫組織化學染色法進行E-選擇素染色，采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包對所得數(shù)據進行統(tǒng)計分析。 結果：1、HE染色觀察：傷后1h，創(chuàng)口周圍毛細血管擴張、充血，組織間水腫；傷后12h內，可見大量炎性細胞游出，主要以中性粒細胞浸潤為主；傷后1～3d

6、，肉芽組織逐漸形成并大量增生，炎性細胞以單核-巨噬細胞為主；傷后5～7d，肉芽組織成熟，成纖維細胞生成，炎性細胞消失，創(chuàng)口基本愈合。死后造創(chuàng)組及正常對照組鏡下無上述改變。死后在-20℃下6小時至7d，皮膚損傷部位組織結構與斷頸處死即刻基本一樣，沒有發(fā)生明顯變化，在第6、7d可見其內極少數(shù)炎癥細胞結構欠清晰，核固縮、粹裂，但邊緣、組織結構較清楚；在25℃下，皮膚損傷部位組織中炎癥細胞、部分組織細胞逐漸自溶；以至損傷邊緣結構模糊不清。2、免

7、疫組織化學SABC法染色觀察：傷后1h，創(chuàng)緣周圍毛細血管內皮細胞可見棕黃色陽性表達，以后持續(xù)升高，至傷后1d，陽性表達達到高峰：以后表達逐漸減弱，至傷后7d，仍可見有少量陽性表達。-20℃死穩(wěn)定性組中，不同時間陽性表達與傷后1d處死即刻沒有明顯變化；25℃環(huán)境中，隨著時間延長，組織及細胞的自溶，各亞組的表達情況與傷后1d處死即刻有明顯變化，陽性表達逐漸減少，在2d時未見表達。在正常對照組及死后傷組中均未見E-選擇素表達。3、陽性細胞計數(shù)

8、法結果：陽性細胞率（PR值）在傷后1h到傷后1d逐漸上升，傷后1d達到高峰，傷后3d～7d，PR值逐漸下降。4、統(tǒng)計學處理結果：方差分析結果表明生前創(chuàng)傷各相鄰兩組之間E-選擇素PR值相比均具有顯著差異（P<0.01）。其中生前創(chuàng)傷1d組與其他各時間組相比均有顯著差異（P<0.01）。 結論：大鼠皮膚切創(chuàng)后E-選擇素可迅速增量表達，且與時間相關，呈一定規(guī)律性，呈上升-高峰-下降的時序變化；在傷后1d達到高峰。E選擇素在生前及死后均