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文檔簡介
1、研究背景及目的:皮膚作為人體最大的器官,與外界直接接觸,對機體具有重要的屏障和保護作用,其最易遭受機械性損傷.在法醫(yī)學實踐中,皮膚損傷時間的推斷常是法醫(yī)工作者需要解決的關鍵問題。正因為如此,關于皮膚損傷時間推斷方面的研究,一直以來是國內外法醫(yī)病理學者的研究熱點問題之一。E-選擇素是細胞粘附分子(adhesion molecule,AM)中選擇素家族(selectin family,SF)成員之一。在體內分布非常局限,主要由毛細血管、后微
2、靜脈的內皮細胞分泌,其胞內無儲存。它只在外傷、炎癥等刺激后在血管內皮細胞表面表達,且具有特異性。E-選擇素產生后,參與記憶T淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞的聚集,以及內皮細胞增殖、遷移、管狀形成和毛細血管的生成,但最主要是介導血液中中性粒細胞粘附。E-選擇素參與損傷早期修復作用,目前國內外對E-選擇素的研究多側重于臨床方面,而對于它在法醫(yī)學領域方面對皮膚損傷后不同時間的表達變化及死后穩(wěn)定性的研究甚少。尤其是國內對E-選擇
3、素在皮膚機械性損傷修復時間的推斷方面幾乎未見報道。本研究通過建立大鼠皮膚切創(chuàng)損傷模型,運用免疫組化技術及其陽性細胞計數(shù)法對損傷組織進行E-選擇素的檢測與分析,探討在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中其表達的時序性變化規(guī)律,以及死后穩(wěn)定性狀況,有可能為法醫(yī)病理學皮膚損傷時間的推斷,鑒別生前傷和死后傷提供一個新的理論依據。 方法:采用完全隨機分組方法,分為實驗組和對照組。實驗組又分為生前造創(chuàng)組、死后造創(chuàng)組、死后穩(wěn)定性-20℃和25℃組。根據造創(chuàng)后處
4、死時間不同,將實驗大鼠隨機分為傷后30min、1h、2h、3h、5h、7h、9h、12h、1d、3d、5d、7d共12亞組;死后造創(chuàng)組分為0.5h,1h,3h共3亞組;另設一組為正常對照組,即未造創(chuàng)組。生前造創(chuàng)組在大鼠頭部制做全層切創(chuàng),在預定時間分別頸椎脫臼法處死后即刻取材;死后造創(chuàng)組于處死大鼠后在預定時間造創(chuàng)取材。死后穩(wěn)定性組中將大鼠造創(chuàng)后于ld將它們頸椎脫臼法處死。隨機分為14亞組,其中9亞組置于-20℃環(huán)境中,于6h、12h和1d
5、、2d、3d、4d、5d、6d、7d取材;另5亞置于25℃環(huán)境中,于6h、12h和1d、2d、3d取材。取材皮膚組織用多聚甲醛-PBS液中固定后,石蠟包埋切片,進行常規(guī)HE染色光鏡觀察;采用免疫組織化學染色法進行E-選擇素染色,采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包對所得數(shù)據進行統(tǒng)計分析。 結果:1、HE染色觀察:傷后1h,創(chuàng)口周圍毛細血管擴張、充血,組織間水腫;傷后12h內,可見大量炎性細胞游出,主要以中性粒細胞浸潤為主;傷后1~3d
6、,肉芽組織逐漸形成并大量增生,炎性細胞以單核-巨噬細胞為主;傷后5~7d,肉芽組織成熟,成纖維細胞生成,炎性細胞消失,創(chuàng)口基本愈合。死后造創(chuàng)組及正常對照組鏡下無上述改變。死后在-20℃下6小時至7d,皮膚損傷部位組織結構與斷頸處死即刻基本一樣,沒有發(fā)生明顯變化,在第6、7d可見其內極少數(shù)炎癥細胞結構欠清晰,核固縮、粹裂,但邊緣、組織結構較清楚;在25℃下,皮膚損傷部位組織中炎癥細胞、部分組織細胞逐漸自溶;以至損傷邊緣結構模糊不清。2、免
7、疫組織化學SABC法染色觀察:傷后1h,創(chuàng)緣周圍毛細血管內皮細胞可見棕黃色陽性表達,以后持續(xù)升高,至傷后1d,陽性表達達到高峰:以后表達逐漸減弱,至傷后7d,仍可見有少量陽性表達。-20℃死穩(wěn)定性組中,不同時間陽性表達與傷后1d處死即刻沒有明顯變化;25℃環(huán)境中,隨著時間延長,組織及細胞的自溶,各亞組的表達情況與傷后1d處死即刻有明顯變化,陽性表達逐漸減少,在2d時未見表達。在正常對照組及死后傷組中均未見E-選擇素表達。3、陽性細胞計數(shù)
8、法結果:陽性細胞率(PR值)在傷后1h到傷后1d逐漸上升,傷后1d達到高峰,傷后3d~7d,PR值逐漸下降。4、統(tǒng)計學處理結果:方差分析結果表明生前創(chuàng)傷各相鄰兩組之間E-選擇素PR值相比均具有顯著差異(P<0.01)。其中生前創(chuàng)傷1d組與其他各時間組相比均有顯著差異(P<0.01)。 結論:大鼠皮膚切創(chuàng)后E-選擇素可迅速增量表達,且與時間相關,呈一定規(guī)律性,呈上升-高峰-下降的時序變化;在傷后1d達到高峰。E選擇素在生前及死后均
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