Caveolin-1與RUNX3在胃癌組織細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　以人runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(human runt-related transcription factor3,RUNX3)的表達(dá)特點為參照，通過免疫組化，Western等試驗方法，檢測小凹蛋白-1（Caveolin-1）在胃癌癌變過程中不同時期的胃組織上的表達(dá)，結(jié)合其他實驗小組前期實驗數(shù)據(jù)，分析Caveolin-1于胃癌的不同發(fā)展時期的表達(dá)特點，為進(jìn)一步深入研究Caveolin-1在胃癌的發(fā)生及發(fā)展過程中的具體作用及其

2、對細(xì)胞凋亡機(jī)制所起到的影響提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　實驗所需胃癌石蠟和冰凍組織標(biāo)本選自泰安市中心醫(yī)院癌組織庫，采集的胃癌組織與癌旁組織粘膜和正常胃粘膜作為對照。將術(shù)后提取的標(biāo)本，經(jīng)冰凍、分割、定位篩選處理，然后使用陣列制作設(shè)備，在所選取組織的陣列載體上，按照固定間隔盒順序制成組織冰凍微陣列。分別采用免疫組織化學(xué)和Western蛋白印跡分析兩種方法，在相同的實驗設(shè)備、同當(dāng)量試劑和實驗過程下分別對84例冰凍標(biāo)本中RUNX3

3、和Caveolin-1的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，其中胃癌28例、正常癌組織28例、癌旁組織28例。免疫組化實驗后鏡下取像，圖像密度通過NIH Image software進(jìn)行測量并用于統(tǒng)計分析；通過熒光自顯影感光技術(shù)將Westem蛋白印跡印刻在Kodak XAY膠卷上，應(yīng)用NIH gelanalysis software測出條帶密集度并用于統(tǒng)計分析。所有結(jié)果通過平均值±SEM表示。這些結(jié)果通過one-way ANOVA進(jìn)行分析。P<0.05在

4、統(tǒng)計學(xué)上被認(rèn)為有顯著性差異。
　　結(jié)果:
　　1、RUNX3和caveolin-1在正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的表達(dá)與分布采用免疫組織化學(xué)染色法，在同等實驗條件下，對各組織中RUNX3和caveolin-1的表達(dá)和分布加以分析。低倍鏡（10X）下觀察，RUNX3在胃癌組織中呈弱著色，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其在正常胃組織和胃癌旁組織上的著色。Caveolin-1的著色與RUNX3基本一致。顯微鏡下觀察并進(jìn)行統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，RUNX3在

5、正常胃組織中（84.74％）、癌旁組織中（83.66%）和癌組織中（17.13%）的表達(dá)差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Caveolin-1在正常胃組織中（87.54%）、癌旁組織中（84.3%）和癌組織中（12.5%）的表達(dá)與RUNX3的表達(dá)基本一致。
　　2、Western蛋白印記檢測
　　為了驗證免疫組化染色的結(jié)果，我們進(jìn)行了RUNX3和caveolin-1在各組織中的Western蛋白印跡分析。正常胃組織與癌

6、旁組織中可以檢測出較強(qiáng)的RUNX3和caveolin-1的標(biāo)記信號，而胃癌組織中僅有微弱的信號。通過統(tǒng)計學(xué)分析，RUNX3和caveolin-1在胃癌組織中的表達(dá)明顯低于正常癌組織和癌旁組織（*P<0.05）。這些結(jié)果說明caveolin-1在各種胃組織中的表達(dá)與RUNX3的表達(dá)基本一致。
　　結(jié)論：
　　1、Caveolin-1在胃不同組織中的表達(dá)符合腫瘤抑制因子的特點，因此，提示Caveolin-1在胃組織癌變中起到腫瘤

7、抑制效果。
　　2、RUNX3在胃癌組織中表達(dá)偏低，提示其為腫瘤抑制因子特點，與現(xiàn)今主流觀點一致。
　　3、根據(jù)RUNX3在TGF-β傳導(dǎo)路中所起的作用，結(jié)合實驗結(jié)果，提示RUNX3通過調(diào)節(jié)TGF-β通路的相關(guān)因子的激酶激活途徑，起到引導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。
　　4、由于Caveolin-1和RUNX3都與TGF-β信號傳導(dǎo)通路相關(guān)，提示Caveolin-1可能與RUNX3一樣，參與到TGF-β信號傳導(dǎo)通路的信號傳導(dǎo)中，起