運(yùn)用負(fù)壓外擴(kuò)張誘導(dǎo)構(gòu)建預(yù)擴(kuò)張的脂肪組織.pdf

1、目的：
　　因先天性畸形、外科手術(shù)、意外創(chuàng)傷等多種原因?qū)е碌能浗M織缺損是整形外科臨床診療過程中經(jīng)常遇到的問題，而尋找到合適的軟組織來源用于這種軟組織缺損的修復(fù)重建一直是整形外科醫(yī)生面臨的巨大難題。
　　已經(jīng)有越來越多的學(xué)者證實(shí)，機(jī)械牽拉能產(chǎn)生組織再生效應(yīng)。臨床上也已經(jīng)有多種基于組織機(jī)械拉伸的治療裝置。埋置擴(kuò)張器是臨床中廣泛應(yīng)用的技術(shù)，其基于組織擴(kuò)張的原理，對軟組織進(jìn)行機(jī)械擴(kuò)張，被證實(shí)能夠促進(jìn)組織細(xì)胞的分裂增殖從而增加皮膚軟組

2、織面積，在皮膚和軟組織的修復(fù)缺損以及體表器官的再造中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近年，通過負(fù)壓外吸引產(chǎn)生組織外擴(kuò)張的裝置Brava被發(fā)明，其基于組織機(jī)械拉伸的原理，連續(xù)使用一段時(shí)間則可以產(chǎn)生穩(wěn)定的組織生長。Brava誘導(dǎo)產(chǎn)生組織再生的證據(jù)給了我們啟發(fā)，因?yàn)橥ㄟ^負(fù)壓外吸引產(chǎn)生組織外擴(kuò)張的方式具有無創(chuàng)性，因而更能獲得患者的認(rèn)可，也就意味著具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　本研究擬通過設(shè)計(jì)大鼠脂肪瓣負(fù)壓外擴(kuò)張模型，對帶血管蒂的島狀脂肪瓣外部進(jìn)行負(fù)壓外擴(kuò)張

3、，驗(yàn)證脂肪瓣能否在單純機(jī)械力作用下產(chǎn)生組織再生，同時(shí)研究脂肪瓣在負(fù)壓外擴(kuò)張之后發(fā)生的細(xì)胞水平和分子水平的變化，初步揭示負(fù)壓外擴(kuò)張產(chǎn)生脂肪組織再生的機(jī)制，為臨床修復(fù)軟組織缺損提供一個(gè)新的選擇。
　　方法：
　　本研究分為兩個(gè)部分：
　　1.運(yùn)用負(fù)壓外擴(kuò)張誘導(dǎo)構(gòu)建預(yù)擴(kuò)張的脂肪組織的組織學(xué)觀察
　　構(gòu)建大鼠帶血管蒂脂肪瓣負(fù)壓外擴(kuò)張模型，觀察經(jīng)過不同時(shí)間的負(fù)壓外擴(kuò)張之后脂肪瓣體積的變化，驗(yàn)證負(fù)壓外擴(kuò)張是否獲得脂肪組織的生

4、長，并通過HE染色、免疫熒光、RT-PCR揭示脂肪瓣在負(fù)壓外擴(kuò)張之后組織學(xué)的動(dòng)態(tài)變化過程。收集數(shù)據(jù)后采用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析處理。
　　2.負(fù)壓外擴(kuò)張誘導(dǎo)脂肪組織再生的機(jī)制的初步研究
　　利用大鼠脂肪瓣負(fù)壓外擴(kuò)張模型，觀察負(fù)壓外擴(kuò)張之后脂肪組織中炎癥細(xì)胞因子表達(dá)情況，探討負(fù)壓外擴(kuò)張所產(chǎn)生的炎癥微環(huán)境對于脂肪組織再生所發(fā)揮的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)作用。收集數(shù)據(jù)后采用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析處理。
　　結(jié)果：
　　1.對照組

5、脂肪瓣體積增長不明顯；實(shí)驗(yàn)組體積隨時(shí)間增加而增長明顯。脂肪瓣體積由基線的1.633±0.163ml在第4周增加為1.783±0.147ml（對照組）和2.15±0.350ml（實(shí)驗(yàn)組）；第8周增加為1.850±0.164ml（對照組）和2.917±0.365ml（實(shí)驗(yàn)組）；第12周增加為1.867±0.150ml（對照組）和3.717±0.337ml（實(shí)驗(yàn)組）。其中實(shí)驗(yàn)組脂肪瓣在第4周（P<0.05）、8周（P<0.001）和12周（P

6、<0.001）均大于對照組。實(shí)驗(yàn)組脂肪瓣在16周降低為3.317±0.256ml，較12周實(shí)驗(yàn)組有部分回縮（P<0.05），但仍然是基線體積的約兩倍。
　　經(jīng)過負(fù)壓外吸引后脂肪組織中血管化豐富的纖維結(jié)締成分增多。血管計(jì)數(shù)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組毛細(xì)血管密度在第4、8、12周均表現(xiàn)出顯著高于對照組，在第16周相較于12周有明顯的回落，呈現(xiàn)為接近基線脂肪瓣的水平。
　　脂肪組織中ki67+/CD34+細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組中顯著增加，在1周時(shí)達(dá)到峰

7、值，然后從4周到12周呈現(xiàn)逐漸下降。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示在第1、4、8、12周，實(shí)驗(yàn)組的ki67+/CD34+細(xì)胞數(shù)多于對照組，在16周則降為接近對照組。該結(jié)果提示負(fù)壓外擴(kuò)張之后發(fā)生了活躍的血管重構(gòu)和細(xì)胞增殖。
　　脂肪組織經(jīng)過負(fù)壓外吸引1周后，PPARγ和CEBPβ的相對表達(dá)量即有顯著升高；隨著處理的時(shí)間增加，其相對表達(dá)量進(jìn)一步增加；在停止負(fù)壓外吸引后，PPARγ和CEBPβ的相對表達(dá)量回落到低水平。該研究結(jié)果提示負(fù)壓外擴(kuò)張?zhí)幚砟軌蛏?/p>

8、調(diào)成脂分化過程。
　　2.實(shí)驗(yàn)組在經(jīng)過負(fù)壓外吸引后，IL-1β，IL-6，TNF-α，MIF水平顯著升高，在1周時(shí)達(dá)到峰值，其中IL-1β、IL-6分別升高約3、6倍，TNF-α升高約13倍，MIF升高約14倍。在4、8、12周各因子水平均有回落，但仍然維持高表達(dá)水平，對比第1周時(shí)降低差異顯著。停止負(fù)壓外吸引后各因子水平繼續(xù)回落至對照組水平。結(jié)合第一章的結(jié)果，提示負(fù)壓外擴(kuò)張產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)狀態(tài)可能參與了脂肪組織再生的調(diào)控。