乙醇脫氫酶ADH1B基因?qū)θ私Y(jié)直腸癌細(xì)胞增殖及遺傳物質(zhì)穩(wěn)定性的影響.pdf

1、結(jié)直腸癌(Colorectal cancer, CRC)是全球最常見(jiàn)的腫瘤，經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、生活方式、飲食習(xí)慣的改變導(dǎo)致其發(fā)生率、死亡率明顯上升并表現(xiàn)為年輕化，危害人類健康。CRC的發(fā)生不易察覺(jué)，當(dāng)病人確診時(shí)已是晚期，如何更早的發(fā)現(xiàn)及治療成為研究的難題。ADH1B是乙醇脫氫酶家族的成員，研究發(fā)現(xiàn)ADH1B的表達(dá)量在結(jié)直腸癌與正常組織中存在著明顯的差異。本實(shí)驗(yàn)將ADH1B基因過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SW620細(xì)胞，構(gòu)建ADH1B基因過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，來(lái)

2、探討ADH1B基因過(guò)表達(dá)對(duì)SW620細(xì)胞增殖及遺傳物質(zhì)穩(wěn)定性的影響。此外，采用奧沙利鉑和阿司匹林單獨(dú)及聯(lián)合用藥的方案，檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖的影響。旨在通過(guò)研究ADH1B基因與結(jié)直腸癌之間的相互關(guān)系，探討基因手段與藥物化療聯(lián)合治療結(jié)直腸癌的方法，降低癌細(xì)胞多藥耐藥性，減輕患者痛苦，提高生存質(zhì)量。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染獲得過(guò)表達(dá)ADH1B基因的穩(wěn)定細(xì)胞系，采用Western blot和Q-PCR技術(shù)分別從蛋白質(zhì)水平、

3、RNA水平檢測(cè)ADH1B基因過(guò)表達(dá)效果；利用克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK-8法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法來(lái)探究ADH1B基因過(guò)表達(dá)對(duì)SW620細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)ADH1B基因顯著促進(jìn)SW620細(xì)胞的增殖(P＜0.05)。⑵通過(guò)微核試驗(yàn)來(lái)觀察過(guò)表達(dá)ADH1B基因?qū)W620細(xì)胞遺傳物質(zhì)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未過(guò)表達(dá)的SW620細(xì)胞相比，過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的微核率、核芽率明顯減少(P＜0.05)。推測(cè)ADH1B基因與結(jié)直腸癌細(xì)胞遺傳物質(zhì)的損傷存在一定的

4、聯(lián)系，過(guò)表達(dá)ADH1B基因可能會(huì)使得細(xì)胞通過(guò)某種方式清除微核，從而引起SW620細(xì)胞微核率降低，減少遺傳物質(zhì)損傷。⑶通過(guò)CCK-8法與臺(tái)盼藍(lán)染色來(lái)觀察單獨(dú)用藥和兩種藥物不同貫序用藥對(duì)SW620細(xì)胞的抑制作用，采用Annexin V-FITC&PI染色法區(qū)分細(xì)胞凋亡早、中、晚期以及壞死細(xì)胞，并利用半數(shù)抑制濃度(50％concentration of inhibition, IC50)確定藥物的最佳使用濃度。結(jié)果顯示，不同用藥組對(duì)細(xì)胞抑制作