稀有鮈鯽性別分化相關基因的克隆與分析.pdf_第1頁
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1、稀有鮈鯽為我國特有的實驗動物,其性別分化機制亦不清楚。為了了解稀有鮈鯽的性別決定模式和性別分化的分子基礎,本研究進行了稀有鮈鯽激素處理及其后代分析,克隆和分析了與性別分化緊密相關的部分基因如卵巢型與腦型芳香化酶基因及dmrt1。初步研究了芳香化酶基因和dmrt1在稀有鮈鯽性別決定及分化過程中的作用,對稀有鮈鯽性別決定模式進行了初步探討。 一、采用RT-PCR和RACE方法,獲得稀有鮈鯽性腺型芳香化酶基因(Cyp19a),其長度為

2、2246bp,編碼520個氨基酸殘基,具有典型的芳香化酶結構域。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)該基因特異表達于性腺,且卵巢中表達量高于精巢中。胚胎發(fā)育不同時期檢測發(fā)現(xiàn),Cyp19a的表達從囊胚期開始,至出苗5天均維持在穩(wěn)定的低表達水平,出苗10天后有所增強并維持在該水平。說明Cyp19a特異表達于性腺,推測其直接參與性腺中雌激素的合成過程,對性腺的發(fā)育和分化起重要作用。 二、采用RT-PCR和RACE的方法,獲得稀有鮈鯽腦型芳香化酶基因(

3、Cyp19b)全序列,其長度為2191 bp,編碼507個氨基酸殘基,具有典型的芳香化酶結構域。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)該基因主要在稀有鮈鯽的腦中表達,在性腺、腸、腎中也有表達。在胚胎發(fā)育階段,Cyp19b的表達從囊胚期開始,至神經胚期達到較高水平,隨后下降,孵化期又有所增強,孵化10天后維持在高水平。這些結果說明Cyp19b主要在腦中表達,可能在稀有鮈鯽神經系統(tǒng)發(fā)育和腦的性別分化中起重要作用。 三、采用RT-PCR和RACE方法,

4、獲得稀有鮈鯽dmrt1基因全長,其長度為2098bp,編碼266個氨基酸殘基,具有典型的DM結構域。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)該基因特異表達于性腺,但精巢中表達量高于卵巢。胚胎發(fā)育不同時期檢測發(fā)現(xiàn),dmrt1為一母源性基因,其表達從合子期開始,并且維持較穩(wěn)定的高水平表達。表明dmrt1可能參與早期性別決定的發(fā)生和發(fā)育調控過程。 四、對3個基因在幼魚不同發(fā)育階段單個個體的表達情況的研究表明,出苗25天,Cyp19a出現(xiàn)第一個表達高峰,此

5、時Cyp19b表達水平也有所上升,但不顯著。40天時dmrt1出現(xiàn)第一個表達高峰。3個基因在第25天、45天、50天時出現(xiàn)較強的個體差異性,且芳香化酶基因與dmrt1在個體中的表達呈現(xiàn)相反趨勢。出苗后10天,芳香化酶基因表達量較之出苗之前各發(fā)育時期顯著升高,且Cyp19a/dmrt1的相對表達出現(xiàn)個體差異。推測稀有鮈鯽的性別分化關鍵時期為孵化后的10-25天,從出苗后45天~50天可能是性別分化的完成時期。而且推斷稀有鮈鯽在性別未分化前

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