稀有鮈鯽角蛋白18基因全序列和啟動子的克隆及轉(zhuǎn)基因技術(shù)在熒光稀有鯽培育上的應用.pdf

1、我國是世界水產(chǎn)大國，將轉(zhuǎn)基因等現(xiàn)代生物技術(shù)引入傳統(tǒng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖中，已成為必然的發(fā)展趨勢?，F(xiàn)代生物技術(shù)，在觀賞水族業(yè)中，更具應用前景。隨著組織特異性啟動子研究的深入，用熒光基因構(gòu)建重組子，并轉(zhuǎn)入魚受精卵中，獲得在不同部位發(fā)熒光的轉(zhuǎn)基因觀賞魚技術(shù)已經(jīng)得到初步應用。稀有鮈鯽(Gobiocyprisrarus)是我國特有的一種小型鯉科魚類，并已作為一種新型的模式實驗魚應用于魚類遺傳學、魚病學、環(huán)境科學以及轉(zhuǎn)基因觀賞魚等研究領(lǐng)域。其所具有的優(yōu)良特性

2、使其具備通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)開發(fā)培育類似于斑馬魚(Daniorerio)、青鳉(Oryziaslatipes)等觀賞魚的潛在可能性。
　　 角蛋白18是角蛋白的一種，屬于S型角蛋白，是在哺乳動物和兩棲類動物胚胎發(fā)育中第一個表達的中間纖維蛋白。本研究根據(jù)已發(fā)表的人、爪蟾及斑馬魚角蛋白18DNA序列，通過DNAman同源性比較獲得保守序列，并從中設(shè)計二對引物。從稀有鮈鯽基因組中PCR擴增得到2779bp的角蛋白18的DNA序列片段；通過基

3、因組步移，分別獲得該基因的上游和下游序列片段；最后將獲得的全基因片段克隆至質(zhì)粒載體pMD19-T進行序列測定檢驗。結(jié)果顯示所克隆的稀有絢鯽角蛋白18基因全長3765bp。對該基因進行NCBI的Blastn同源性比較分析，表明稀有觴鯽同斑馬魚比較角蛋白18DNA序列存在73.6％同源相似性；同時對該基因進行生物學分析，ORF預測表明稀有鮈鯽角蛋白18是含有7個外顯子和6個內(nèi)含子，共編碼367個氨基酸的蛋白質(zhì)。
　　 轉(zhuǎn)座子是存在于