稀有鮈鯽角蛋白18基因全序列和啟動(dòng)子的克隆及轉(zhuǎn)基因技術(shù)在熒光稀有鯽培育上的應(yīng)用.pdf

1、我國(guó)是世界水產(chǎn)大國(guó)，將轉(zhuǎn)基因等現(xiàn)代生物技術(shù)引入傳統(tǒng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖中，已成為必然的發(fā)展趨勢(shì)?，F(xiàn)代生物技術(shù)，在觀賞水族業(yè)中，更具應(yīng)用前景。隨著組織特異性啟動(dòng)子研究的深入，用熒光基因構(gòu)建重組子，并轉(zhuǎn)入魚(yú)受精卵中，獲得在不同部位發(fā)熒光的轉(zhuǎn)基因觀賞魚(yú)技術(shù)已經(jīng)得到初步應(yīng)用。稀有鮈鯽(Gobiocyprisrarus)是我國(guó)特有的一種小型鯉科魚(yú)類(lèi)，并已作為一種新型的模式實(shí)驗(yàn)魚(yú)應(yīng)用于魚(yú)類(lèi)遺傳學(xué)、魚(yú)病學(xué)、環(huán)境科學(xué)以及轉(zhuǎn)基因觀賞魚(yú)等研究領(lǐng)域。其所具有的優(yōu)良特性

2、使其具備通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)開(kāi)發(fā)培育類(lèi)似于斑馬魚(yú)(Daniorerio)、青鳉(Oryziaslatipes)等觀賞魚(yú)的潛在可能性。
　　 角蛋白18是角蛋白的一種，屬于S型角蛋白，是在哺乳動(dòng)物和兩棲類(lèi)動(dòng)物胚胎發(fā)育中第一個(gè)表達(dá)的中間纖維蛋白。本研究根據(jù)已發(fā)表的人、爪蟾及斑馬魚(yú)角蛋白18DNA序列，通過(guò)DNAman同源性比較獲得保守序列，并從中設(shè)計(jì)二對(duì)引物。從稀有鮈鯽基因組中PCR擴(kuò)增得到2779bp的角蛋白18的DNA序列片段；通過(guò)基

3、因組步移，分別獲得該基因的上游和下游序列片段；最后將獲得的全基因片段克隆至質(zhì)粒載體pMD19-T進(jìn)行序列測(cè)定檢驗(yàn)。結(jié)果顯示所克隆的稀有絢鯽角蛋白18基因全長(zhǎng)3765bp。對(duì)該基因進(jìn)行NCBI的Blastn同源性比較分析，表明稀有觴鯽同斑馬魚(yú)比較角蛋白18DNA序列存在73.6％同源相似性；同時(shí)對(duì)該基因進(jìn)行生物學(xué)分析，ORF預(yù)測(cè)表明稀有鮈鯽角蛋白18是含有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，共編碼367個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。
　　 轉(zhuǎn)座子是存在于