龍眼子葉胚發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白的研究.pdf

1、龍眼(Dimdcarpus longana Lour.)是亞熱帶具有重要經(jīng)濟(jì)價值的果樹，屬無患子科(Saindaceae)龍眼屬。龍眼生產(chǎn)中，果粒大小是影響品質(zhì)的一個重要因素。盡管目前在植物胚胎發(fā)育方面的研究已經(jīng)比較深入，但仍未能從根本上闡明植物胚胎的發(fā)生、發(fā)育規(guī)律。 本研究采用雙向電泳技術(shù)分離‘青殼寶元’龍眼子葉胚蛋白，通過比較不同發(fā)育時期的蛋白質(zhì)表達(dá)差異情況，以及差異蛋白的生物學(xué)功能分析，揭示了龍眼胚胎發(fā)育的分子本質(zhì)。試驗中

2、對蛋白質(zhì)樣品的制備、雙向電泳參數(shù)、染色等技術(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，建立了適合龍眼胚胎蛋白質(zhì)組學(xué)的研究平臺。 采用pH4-7的膠條和凝膠濃度為12.5％的SDS-PAGE，在經(jīng)過考染的雙向電泳圖譜上共檢測到1000多個胚胎可溶性蛋白。利用PDQuest軟件分析比較蛋白質(zhì)圖譜，得到46個在子葉胚發(fā)育不同時期表達(dá)量明顯發(fā)生變化的蛋白，選取36個蛋白豐度表達(dá)變化在2倍以上的差異蛋白點進(jìn)行MALDI-TOF-TOF/MS分析，經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索，鑒定出2

3、6個蛋白，其中13個蛋白上調(diào)表達(dá)，11個蛋白下調(diào)表達(dá)，另有2個蛋白呈現(xiàn)波動變化。這些蛋白的功能涉及能量代謝(23％)、次生代謝(15％)、蛋白質(zhì)代謝(27％)、抗氧化作用(4％)、核酸代謝(4％)、未分類蛋白(8％)、未知蛋白(19％)，其中一些蛋白是首次被發(fā)現(xiàn)與胚胎發(fā)育相關(guān)。此外，進(jìn)一步用Western雜交對抗壞血酸過氧化物酶在龍眼子葉胚發(fā)育過程中的表達(dá)變化進(jìn)行驗證。 通過對龍眼子葉胚發(fā)育過程中差異表達(dá)蛋白的功能分析，我們獲得