低溫誘導過程中金釵石斛花芽蛋白質差異表達研究.pdf

1、石斛是當前國際花卉市場上最重要的花卉之一。金釵石斛為春化型植物，即必須要有一定的低溫處理才可以開花。本文采用蛋白質組學技術研究了金釵石斛（Dendrobium nobile）低溫處理過程中蛋白質差異表達的變化情況。
　　 1.選取金釵石斛（Dendrobium nobile）成熟苗置于人工氣候室中低溫處理，溫度設置為：16±1℃/10±1℃，12h/12h（白天/晚上），自然光照。分別在0d，10d和20d取其芽點，樣品液氮速凍

2、后放入-80℃冰箱保存以備提取蛋白。
　　 2.建立金釵石斛花芽蛋白雙向電泳體系：對樣品制備，IPG膠條的pH值范圍等進行了優(yōu)化：采用酚抽提法提取蛋白；樣品與水化液1:40復溶；選用pH值5-8的膠條和12％的凝膠分離蛋白；采用考馬斯亮藍G-250染色，獲得了可識別約1000個蛋白質斑點的雙向電泳圖譜，且重復性好、分辨率高。
　　 3.研究了金釵石斛花芽在低溫誘導過程中蛋白質差異表達的變化情況。結果表明：低溫處理后發(fā)現(xiàn)5

3、2個差異表達的蛋白質點，其中上調表達的11個，下調表達的20個，波動表達的13個，具有質的變化蛋白點有8個。對36個差異顯著蛋白質斑點進行基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜串聯(lián)質譜分析，共獲得34個較好的二級質譜圖，通過數(shù)據(jù)庫搜索，其中有34個蛋白質得到了鑒定。這些蛋白質主要與物質和能量代謝，低溫響應細胞防御，蛋白質生物合成及細胞內組分重建等生物學功能相關，以滿足植物生長發(fā)育所
　　 4.鑒定的差異蛋白中以細胞防御相關的蛋白最多，

4、包括小熱激蛋白、銅-鋅超氧化物歧化酶、異黃酮還原酶類蛋白、過氧化物蛋白、乳酸酰谷胱甘肽裂解酶、谷胱甘肽轉移酶和抗壞血酸氧化酶；其次為能量代謝，包括葉綠素a/b結合蛋白、核酮糖1，5-2磷酸羧化/加氧酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、膜聯(lián)蛋白、植物凝集素和ATP結合蛋白；第三部分為蛋白質代謝的蛋白（谷酰胺合成酶，泛素結合蛋白，富含甘氨酸的RNA-結合蛋白）；第四部分為細胞骨架蛋白（肌動蛋白1和肌動蛋白類蛋白）；另外還有兩個病毒相關蛋白（病程相關蛋