寧夏枸杞子的活性成分研究和應(yīng)用開(kāi)發(fā).pdf

1、本課題為第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科與陜西方舟制藥有限公司的合作研究項(xiàng)目。
　　枸杞為茄科枸杞屬植物,主要分布于我國(guó)西北、西南、華中、華南和華東各省,并且各地均有栽培。枸杞子為枸杞的成熟果實(shí),為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材,具有提高免疫力、抗氧化、清除自由基等藥理作用,主要用于腫瘤以及一些老年疾病如糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等的輔助治療。目前對(duì)枸杞子中活性成分作為有效部位的藥用開(kāi)發(fā)較少,且對(duì)其單體成分的分離鑒定等研究也缺乏系統(tǒng)性。
　　本課題的研

2、究主要分為兩個(gè)部分:
　　一、寧夏枸杞子中活性成分的藥用開(kāi)發(fā)
　　1.以枸杞多糖為有效部位開(kāi)發(fā)醫(yī)院制劑
　　根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,枸杞多糖對(duì)糖尿病有較好的防治作用。本課題對(duì)枸杞子中總多糖進(jìn)行提取純化,結(jié)合傳統(tǒng)的水提醇沉提取法并進(jìn)一步優(yōu)化,得到純度較高的枸杞多糖作為有效部位。對(duì)得到的枸杞多糖進(jìn)行制劑工藝的研究,制成膠囊劑,命名為枸杞多糖膠囊。隨后進(jìn)行相關(guān)的藥效學(xué)驗(yàn)證,建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),對(duì)膠囊進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)及急性毒性試驗(yàn),設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)

3、方案等。將以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總整理,已申請(qǐng)獲得軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑臨床研究批件。
　　2.寧夏枸杞子中總黃酮的提取純化工藝研究
　　目前對(duì)枸杞子總黃酮的分離純化主要采用的是大孔吸附樹(shù)脂色譜法,但此法所得到的總黃酮純度較低,效率較差。本課題在文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上,采用大孔吸附樹(shù)脂色譜聯(lián)用聚酰胺色譜的方法,對(duì)枸杞總黃酮進(jìn)行純化。通過(guò)考察工藝的影響因素,確定了最佳工藝條件,最終得到的總黃酮富集物的純度為42.8％,并將此方法申請(qǐng)了中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利

4、。
　　二、寧夏枸杞子的抗氧化活性成分研究
　　采用現(xiàn)代色譜(硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜及HPLC制備等)及波譜(NMR、MS等)技術(shù)對(duì)寧夏枸杞子中的單體成分進(jìn)行分離鑒定。用85%乙醇提取后,從乙酸乙酯萃取層中分離獲得21個(gè)成分,已鑒定了其中15個(gè)的結(jié)構(gòu),包括7個(gè)酚酰胺類(lèi)化合物:N-E-coumaroyl tyramine(1),dihydro-N-caffeoyltyramine(2),trans-

5、N-caffeoyltyramine(3),N-E-feruloyl tyramine(4),lyciumamide A(5),lyciumamide B(6)和lyciumamide C(7);1個(gè)黃酮類(lèi)化合物:槲皮素(15);2個(gè)酚酸類(lèi)化合物:順式對(duì)羥基肉桂酸(11)和反式對(duì)羥基肉桂酸(12);2個(gè)香豆素類(lèi)化合物:東莨菪素(13)和異莨菪亭(14);煙酰胺(10);1個(gè)亞芐基苯乙酮衍生物:artamenone(8);1個(gè)生物堿類(lèi)化合

6、物:2-furylcarbinol-(5'-11)-1,3-cyclo-pentadiene[5,4-c]-1H-cinnoline(9)。其中,化合物5~7為未見(jiàn)報(bào)道的新化合物,化合物1,4,8和9亦為首次從枸杞屬植物中分離得到。
　　采用DPPH自由基清除法及抑制抗壞血酸鹽/Fe2+,CHP或CCl4/NADPH在鼠肝微粒體產(chǎn)生脂質(zhì)體過(guò)氧化的試驗(yàn),對(duì)酚酰胺類(lèi)化合物1和4～7進(jìn)行抗氧化活性測(cè)試。結(jié)果表明:所有化合物均表現(xiàn)出較強(qiáng)的

7、抗氧化活性,其中以化合物1和4的活性最強(qiáng)。
　　課題創(chuàng)新性及研究意義:
　　1.對(duì)枸杞子中的重要活性成分枸杞多糖進(jìn)行了分離純化及藥效學(xué)的驗(yàn)證,證實(shí)了它對(duì)糖尿病的防治作用,并在此基礎(chǔ)下,將其作為有效部位開(kāi)發(fā)成醫(yī)院制劑──枸杞多糖膠囊。
　　2.采用大孔吸附樹(shù)脂色譜聯(lián)用聚酰胺色譜的方法純化了寧夏枸杞子中的總黃酮。通過(guò)考察工藝的影響因素,確定了最佳工藝條件。此法遠(yuǎn)優(yōu)于單一運(yùn)用這兩種色譜進(jìn)行純化的方法,聯(lián)合發(fā)揮了大孔吸附樹(shù)脂和

8、聚酰胺色譜的優(yōu)勢(shì),提高了總黃酮的純度。
　　3.對(duì)枸杞子中的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定,得到21個(gè)化合物,已鑒定了15個(gè)的結(jié)構(gòu),包括7個(gè)酚酰胺類(lèi)化合物1～7。其中,化合物5~7為3個(gè)新化合物,化合物1,4,8和9亦為首次從枸杞屬植物中分離得到。3個(gè)新化合物為酚酰胺類(lèi)二聚體及其衍生物,結(jié)構(gòu)具有一定的新穎性。枸杞屬植物中存在一定量的酚酰胺類(lèi)成分,但多從地下部分分離得到,在果實(shí)中并未見(jiàn)此類(lèi)成分的報(bào)道。本課題所鑒定的二聚體結(jié)構(gòu)類(lèi)型在枸杞屬植物中