人參炔醇抑制胰腺癌干細(xì)胞的增殖及自我更新.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　通過(guò)各種方法及相關(guān)蛋白的測(cè)定，探討人參炔醇對(duì)胰腺癌干細(xì)胞增殖及自我更新的影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　（1）胰腺癌干細(xì)胞培養(yǎng)：胰腺癌Panc-1細(xì)胞在加有EGF、bFGF及B27的干細(xì)胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)基中培養(yǎng)，參照試劑說(shuō)明及其他文獻(xiàn)培養(yǎng)成胰腺癌干細(xì)胞，細(xì)胞的CD133+用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，觀察培養(yǎng)后細(xì)胞的干性比例；
　?。?）胰腺癌干細(xì)胞分選：為了得到更高比例的胰腺癌干細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀將培養(yǎng)的細(xì)

2、胞進(jìn)行CD133+分選。
　?。?）CCK8實(shí)驗(yàn)：將人參炔醇分為0、72、144、287nmol/L四個(gè)藥物濃度分別作用于胰腺癌干細(xì)胞，作用時(shí)間為0、12、24、48h，CCK8實(shí)驗(yàn)選出合適的藥物作用濃度及最佳的作用時(shí)間；
　?。?）克隆實(shí)驗(yàn)：濃度為0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用于胰腺癌干細(xì)胞48h后，將干細(xì)胞消化為單個(gè)細(xì)胞，并重新種于6孔板中培養(yǎng)兩周，形成集落后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組集落的數(shù)目進(jìn)行比較；

3、r>　?。?）western blot實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)增殖相關(guān)蛋白Ki67、PCNA及自我更新有關(guān)蛋白β-catenin。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　（1）經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)體系培養(yǎng)的胰腺癌干細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其CD133+比例為9.96％，對(duì)照組干性比例為2.21%，兩組相比具顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；
　?。?）經(jīng)過(guò)細(xì)胞分選后，胰腺癌干細(xì)胞比例為96.78%，對(duì)照組為3.67%，兩組相比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001

4、）；
　?。?）CCK8實(shí)驗(yàn)OD值檢測(cè)顯示，人參炔醇減少胰腺癌干細(xì)胞的存活率，藥物作用具有濃度依賴性，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)作用加強(qiáng)，0、72、144、287nmol/L的人參炔醇作用胰腺癌干細(xì)胞48h后存活率分別為100%、63.13%、50.32%、41.62%，結(jié)果具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；
　?。?）克隆實(shí)驗(yàn)中，數(shù)量上實(shí)驗(yàn)組的集落少于對(duì)照組（P<0.001）；
　　（5）人參炔醇作用48h后，胰腺癌干細(xì)胞的