RNAi下調(diào)Survivin及VEGF表達(dá)抑制胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及血管形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1 Survivin和/或血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)表達(dá)的抑制作用，對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡的影響;并制備相應(yīng)的條件培養(yǎng)基作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，測(cè)定抑制人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1 survivin表達(dá)后條件培養(yǎng)基對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡的影響;

2、　　方法:分別設(shè)計(jì)并合成針對(duì)Survivin及VEGF的siRNA表達(dá)載體，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PANC-1細(xì)胞。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot半定量檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞內(nèi)Survivin和VEGF的表達(dá)情況;采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PANC-1細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PANC-1細(xì)胞的凋亡率;將各組轉(zhuǎn)染后Panc-1細(xì)胞培養(yǎng)液收集，作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)HU

3、VEC的增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC的凋亡率。
　　結(jié)果:1.成功構(gòu)建4個(gè)針對(duì)Survivin的載體(S1、S2、S3、S4)，Survivin mRNA及蛋白表達(dá)明顯下降，其中載體S4抑制效率最高;抑制Survivin表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖減慢，細(xì)胞凋亡率增加;同時(shí)HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）增殖減慢，細(xì)胞凋亡率增加。
　　2.成功構(gòu)建4個(gè)針對(duì)VEGF的載體(V1、V2、V3、V4)，VEGFmRNA及蛋白表

4、達(dá)明顯下降，其中載體V3抑制效率最高;抑制VEGF表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖減慢，細(xì)胞凋亡率增加;同時(shí)HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）增殖減慢，細(xì)胞凋亡率增加。
　　3.同時(shí)抑制Survivin和VEGF表達(dá)后，較對(duì)照組及單獨(dú)抑制Survivin或VEGF組，胰腺癌細(xì)胞Panc-1增殖顯著減慢，細(xì)胞凋亡率顯著增加;同時(shí)HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）增殖顯著減慢，細(xì)胞凋亡率顯著增加。
　　結(jié)論:1.靶向Survivin或V

5、EGF的RNAi能夠有效抑制胰腺癌細(xì)胞Survivin的表達(dá)，抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖，增加胰腺癌細(xì)胞的凋亡，并通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤血管的形成。
　　2.同時(shí)靶向Survivin及VEGF的RNAi能夠同時(shí)有效抑制胰腺癌細(xì)胞Survivin及VEGF的表達(dá)，較單獨(dú)抑制Survivin或VEGF，顯著抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖，增加胰腺癌細(xì)胞的凋亡，并通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，顯著增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋