凝血酶誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)單核細(xì)胞趨化蛋白-1及其信號通路的研究.pdf

1、研究目的:
　　本研究旨在驗(yàn)證凝血酶是否誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞(human lung fibroblast-1, HLF-1)表達(dá)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)；并驗(yàn)證凝血酶是否通過蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）途徑誘導(dǎo)人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)MCP-1和凝血酶能否增強(qiáng)NF-κB與MCP-1基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合從而提高M(jìn)CP-1轉(zhuǎn)錄水平。

2、r>　　方法：
　　培養(yǎng)人肺成纖維細(xì)胞，分別用幾種不同類型的蛋白激酶抑制劑預(yù)處理人肺成纖維細(xì)胞，再用凝血酶（10 nmol/L）刺激，利用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MCP-1的蛋白表達(dá)；提取細(xì)胞裂解液中總 RNA并逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用實(shí)時(shí)定量 PCR檢測 MCP-1 mRNA表達(dá)水平；采用用染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIPs）技術(shù)檢測在凝血酶的誘導(dǎo)下NF-κB與MCP-1啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合。
　　結(jié)果：
　　凝血酶誘導(dǎo)

3、人肺成纖維細(xì)胞表達(dá)MCP-1；廣譜型PKC抑制劑Bisindolylmaleimide I和RO-31-8220可抑制凝血酶誘導(dǎo)的人肺成纖維細(xì)胞MCP-1蛋白釋放及mRNA表達(dá)，而Ca2+依賴性PKC抑制劑G?6976則沒有抑制效果；IκK抑制劑可抑制凝血酶誘導(dǎo)的人肺成纖維細(xì)胞 MCP-1蛋白釋放及mRNA表達(dá)；在凝血酶的誘導(dǎo)下NF-κB與MCP-1啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合加強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)凝血酶可以呈劑量依賴和時(shí)間