尾加壓素Ⅱ?qū)ρ芡饽こ衫w維細(xì)胞表達(dá)單核細(xì)胞趨化蛋白-1的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：尾加壓素II（urotensin II，UII ）是由11個氨基酸殘基組成的生長抑素樣神經(jīng)環(huán)肽，最早從硬骨魚脊髓尾部下垂體（urophysis ）中分離出來，其活性中心氨基酸序列從魚到人高度保守。GPR14 為其特異性受體，亦稱為UT receptor（UT ），UII 及其受體廣泛分布于心血管、肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腎臟等。UII 是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的內(nèi)源性血管收縮肽，具有許多生理學(xué)效應(yīng)，例如刺激血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和

2、癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成、促進(jìn)心肌肥大、影響其收縮性，此外，對炎性細(xì)胞還有趨化作用，參與了多種心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。目前研究表明，炎性機(jī)制是許多心血管疾病如動脈粥樣硬化、心肌肥大、心功能衰竭等發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一，其中血管外膜成纖維細(xì)胞是參與血管炎癥啟始的重要細(xì)胞之一，而單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)參與心血管系統(tǒng)疾病炎性發(fā)展過程的重要活性因子之一。然而UII 對血管外膜成纖維細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用和機(jī)制尚不清楚。

3、>　　 目的：觀察尾加壓素II 對血管外膜成纖維細(xì)胞(Afs)的MCP-1 表達(dá)的影響，并進(jìn)一步研究其細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　 方法：①用組織貼塊法培養(yǎng)SD 大鼠的Afs，用不同濃度的UII(10-10-10-7mol/L)刺激Afs不同時(shí)間，然后用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及Western 印跡法檢測MCP-1基因和蛋白的表達(dá)，用ELISA 法檢測MCP-1的胞外分泌情況。②用各細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路阻斷劑預(yù)處理Af

4、s 30min，然后用UII（10-8mol/L)刺激Afs 3h和12h，分別從基因水平和蛋白分泌水平觀察細(xì)胞MCP-1的表達(dá)和分泌情況。
　　 結(jié)果：UII 可呈濃度依賴性地上調(diào)MCP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)，與對照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值均<0.05)，10-8mol/L 時(shí)達(dá)到峰值(P<0.01)。UII的最佳刺激時(shí)間點(diǎn)在基因和蛋白水平上分別為3 小時(shí)和24 小時(shí)，在蛋白的胞外分泌水平上為12 小時(shí)。UII的這種

5、刺激MCP-1分泌的作用可以被UII 受體阻斷劑SB710411、Rho 激酶阻斷劑Y27632、蛋白激酶C(PKC)阻斷劑H-7、促有絲分裂蛋白激酶(MAPK)阻斷劑PD98059、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)阻斷劑Cyclosporine A和鈣通道阻斷劑Nicardipine 所抑制，抑制率分別為64.23%、39.14%、70.76%、68.31%、65.92%和63.47%（p值均<0.01 ）。
　　 結(jié)論：UII 呈濃