參芍口服液對糖尿病大鼠心肌纖維化及炎性損傷的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的:大量研究證實(shí)糖尿病心肌病(Diabetic cardiomyopathy, DCM)出現(xiàn)心肌損傷是多因素的，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(Renin-angiotensinaldosterone system，RAAS)及炎性因子的激活在其中發(fā)揮著重要作用。p38絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)與心肌纖維化密切相關(guān)，并可通過調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子-κ B(Nuclear tr

2、anscription factor-κB，NF-κB)的表達(dá)影響糖尿病心肌病的炎性損傷過程。目前研究表明血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)及其特異性1型受體——血管緊張素Ⅱ1型受體(Angiotensin type1 receptor, AT1R)介導(dǎo)RAAS，當(dāng)AngⅡ激活心肌細(xì)胞膜上的AT1R后可上調(diào)p38MAPK的表達(dá)，加重心肌纖維化的進(jìn)程;p38MAPK激活下游的NF-κB通路，調(diào)節(jié)相關(guān)炎性因子基因轉(zhuǎn)錄，加重心

3、肌炎性損傷。
　　為了真正意義上提高糖尿病心肌病患者的預(yù)后及生活質(zhì)量，開發(fā)針對糖尿病心肌病的治療藥物顯得尤為重要，本研究中的參芍口服液（原名:寬心合劑）是在中醫(yī)治療多種炎性痛癥的芍藥甘草湯及治療胸痹的傳統(tǒng)方劑丹參湯的基礎(chǔ)上精制而成的中藥復(fù)方制劑，其對急性缺血-再灌注損傷后心肌纖維化有改善作用。本課題組前期研究表明，參芍口服液可以改善急性心肌炎所導(dǎo)致的心肌纖維化及炎性損傷。
　　基于上述發(fā)現(xiàn)，本課題的研究目的是，探討參芍口服液

4、是否通過調(diào)節(jié)AngⅡ/p38MAPK/NF-κB通路改善糖尿病心肌病大鼠心肌纖維化以及心肌炎性損傷。為傳統(tǒng)中醫(yī)理論找到相關(guān)分子生物學(xué)基礎(chǔ)，同時為早期診斷和緩解糖尿病心肌損傷提供可測指標(biāo)。
　　方法:
　　1分組:將40只170-200g的清潔級(Specific pathogen free，SPF)Wistar雄性大鼠于SPF級動物實(shí)驗(yàn)室喂養(yǎng)1周，將其隨機(jī)分為:①對照組;②模型組;③參芍低劑量組;④參芍中劑量組;⑤參芍高劑量

5、組，每組8只。對照組給予4周普通飼料，模型組、參芍低劑量組、參芍中劑量組、參芍高劑量組給予4周高脂飼料。
　　2造模:模型組、參芍低、中、高劑量組按25 mg/kg劑量腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)(濃度1％，pH4.5)。連續(xù)2次空腹血糖≥16.7 mmol/L，且有多飲、多尿、多食出現(xiàn)，則可確認(rèn)2型糖尿病模型。對照組腹腔內(nèi)注射等體積檸檬酸鈉緩沖液。造模成功后，對照組給予12周普通飼料，模型組、參芍

6、低劑量組、參芍中劑量組、參芍高劑量組給予12周高脂飼料。
　　3給藥劑量及途徑:造模成功后參芍低、中、高劑量組分別給予參芍口服液125、250、500 mg/kg灌胃，對照組和模型組給予等體積蒸餾水灌胃，所有組別均灌胃12周。
　　4各組大鼠全部處死，取心臟左心室部分。HE染色觀察各組大鼠心肌組織病理變化;Masson染色計算心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);應(yīng)用ELISA法計算心肌組織AngⅡ的含量，免疫組化方法觀察AngⅡ

7、、AT1R、TNF-α、NF-κB在糖尿病心肌病大鼠心臟中的蛋白表達(dá);Western blot技術(shù)檢測大鼠心肌p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1藥效學(xué)研究結(jié)果
　　1.1模型組大鼠生理、病理變化:模型組大鼠均出現(xiàn)精神不振、飲水增多、尿量增多、活動減少、體毛不光澤、體重減少等現(xiàn)象。HE染色可以觀察到DCM大鼠心臟出現(xiàn)明顯的病理損傷。
　　1.2參芍口服液降糖效果及對心臟的保護(hù)作用:①

8、參芍低、中、高劑量組的體重較模型組增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);參芍低、中、高劑量組的心體比(Heart weight/Body weight，H/B)較模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);參芍低、中、高劑量組的左室質(zhì)量指數(shù)(Left ventricularweight index，LVMI)較模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);②參芍低、中、高劑量組空腹血糖值較模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)

9、，參芍高劑量組空腹血糖值降低最顯著(P＜0.05);③可改善心肌的病理損傷:Masson染色可以觀察到參芍低、中、高劑量組心肌纖維化不同程度的改善。參芍低、中、高劑量組的CVF較模型組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，參芍高劑量組CVF降低最顯著(P＜0.05)。
　　2心臟保護(hù)機(jī)制研究結(jié)果
　　2.1模型組大鼠病變機(jī)制
　　研究發(fā)現(xiàn)，DCM大鼠表現(xiàn)為:①RAAS活性物質(zhì)增強(qiáng):心肌組織中AngⅡ的含量升高，與對照

10、組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;②心肌纖維化及炎性反應(yīng)增強(qiáng):心肌組織AngⅡ含量增加，心肌細(xì)胞表面AT1R表達(dá)增多，心肌p-p38MAPK蛋白量增多，NF-κB的蛋白表達(dá)增加，炎癥因子TNF-α含量也增加，以上指標(biāo)模型組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.2參芍口服液對DCM大鼠心肌纖維化及炎性損傷的保護(hù)機(jī)制
　　參芍口服液可逆轉(zhuǎn)DCM大鼠心肌纖維化及炎性損傷，表現(xiàn)為:①抑制RAAS活性:參芍低、

11、中、高劑量組心肌組織AngⅡ含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。②抑制心肌心肌纖維化及炎性反應(yīng):心肌組織AngⅡ含量減少，心肌細(xì)胞表面AT1R的蛋白表達(dá)減少，心肌p-p38MAPK的蛋白量減少，NF-κB的蛋白表達(dá)減少，其表達(dá)產(chǎn)物TNF-α釋放也減少，上述指標(biāo)參芍低、中、高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1參芍口服液對DCM心肌纖維化及炎性損傷有改善作用，并在125、250、500