小分子化合物MLN4924靶向NEDD8活化酶(NAE)抑制非小細(xì)胞肺癌增殖的研究.pdf

1、NEDD8是一種類泛素樣蛋白，與泛素化途徑相似，在細(xì)胞生理過程中主要參與穩(wěn)定蛋白、調(diào)節(jié)底物蛋白活性以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等功能[4，6，7]。研究證實(shí)，抑制NEDD8通路將是一個(gè)新的抗腫瘤的方法和途徑。MLN4924是一種有效的、選擇性的NEDD8活化酶的小分子抑制劑，能夠與NEDD8活化酶(NAE)結(jié)合形成NAE-MLN4924復(fù)合物，抑制NEDD8活化酶活性，控制部分依賴于CRL酶的泛素化途徑，影響相關(guān)蛋白質(zhì)的降解[13]。研究發(fā)現(xiàn)，NAE有

2、望成為研發(fā)抗腫瘤藥物的新靶點(diǎn)，MLN4924作為NAE的抑制劑具有成為新型抗腫瘤藥物的希望。
　　目的:
　　本研究以非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞為研究模型，觀察MLN4924對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，分析MLN4924干預(yù)后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖活性、周期分布和周期調(diào)控蛋白的表達(dá)，探討MLN4924對(duì)細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控，明確MLN4924抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌H19

3、75細(xì)胞，MTT實(shí)驗(yàn)分析不同濃度MLN4924作用細(xì)胞24、48和72h對(duì)其增殖的影響;集落克隆實(shí)驗(yàn)分析MLN4924對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響;PI單染法分析細(xì)胞周期分布;以及Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D1和天然抑制蛋白p21、p27的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　MLN4924呈劑量-時(shí)間依賴抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，其中H1975細(xì)胞對(duì)MLN4924較為敏感，不同濃度（5、10、20、4

4、0μM）的MLN4924作用48h后，存活率分別為91.3±2.6％、86.0±4.2％、82.4±4.1％、79.8±3.4％，作用72h后，存活率分別為39.3±5.7％、39.7±4.1％、35.9±2.8％、36.9±2.1％。5、10、20和40μMMLN4924作用細(xì)胞7d，均顯著抑制H1975細(xì)胞形成集落克隆。10和40μM MLN4924作用細(xì)胞48h，G0/G1期細(xì)胞比例顯著增加，周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D