人γδT細(xì)胞聯(lián)合小分子化合物抗肺腺癌活性的研究.pdf

1、目的：探究人γδT細(xì)胞及人γδT細(xì)胞聯(lián)合其他小分子化合物對(duì)肺腺癌的免疫治療的效果及可能的腫瘤細(xì)胞殺傷機(jī)制。
　　方法：首先，通過(guò)唑來(lái)膦酸（zoledronate，Zol）與白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）的共同刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞，獲得高純度的γδT細(xì)胞。并且利用實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)考察γδT細(xì)胞及γδT細(xì)胞聯(lián)合化合物的體外抑制A549細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。其次，建立BalB/c裸鼠荷瘤模型20只，分為4組，每組5只

2、。分別為，Control組：腹腔注射生理鹽水；順鉑組：腹腔注射順-二氯二氨合鉑(II)；γδT組：腹腔注射γδT細(xì)胞；聯(lián)合組：腹腔注射γδT細(xì)胞聯(lián)合本實(shí)驗(yàn)室合成的菲咯啉類小分子化合物及c-Myc抗體，各組每周予以相應(yīng)治療。至建模成功第45天處死所有裸鼠，檢測(cè)腫瘤質(zhì)量及體積并保存。最后，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和Western-blotting檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)c-Myc、PD-1的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：在

3、Zol與IL-2共同刺激14天后，通過(guò)流式細(xì)胞分析系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果提示γδT細(xì)胞已具有較高純度。實(shí)時(shí)細(xì)胞分析結(jié)果表明γδT細(xì)胞對(duì)A549細(xì)胞具有較高的生長(zhǎng)抑制作用，但γδT細(xì)胞聯(lián)合菲咯啉類小分子化合物抑制作用更明顯。通過(guò)對(duì)裸鼠腫瘤治療期間體重、腫瘤體積及解剖后腫瘤質(zhì)量的測(cè)量、記錄發(fā)現(xiàn)：（1）荷瘤裸鼠體重較健康裸鼠有一定程度減輕（p＜0.05），這表明移植瘤對(duì)裸鼠正常生理功能產(chǎn)生影響。（2）相較于Control組，γδT干預(yù)組裸鼠腫瘤體積和質(zhì)

4、量均較?。╬＜0.05），并且聯(lián)合干預(yù)組腫瘤體積和質(zhì)量更小。（3）通過(guò)RT-PCR及Western-blotting實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)γδT干預(yù)組和聯(lián)合干預(yù)組腫瘤組織內(nèi)c-Myc、PD-1轉(zhuǎn)錄與蛋白表達(dá)水平較Control組均較低。
　　結(jié)論：γδT細(xì)胞及γδT細(xì)胞聯(lián)合菲咯啉類小分子化合物及c-Myc抗體在體內(nèi)外均表現(xiàn)出較強(qiáng)腫瘤細(xì)胞抑制作用，并且無(wú)論在體內(nèi)還是體外，γδT細(xì)胞聯(lián)合化合物表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞抑制能力。其殺傷腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能