妊娠期糖尿病胎盤(pán)組織PPAR_對(duì)MMP-2--9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：初步闡明GDM胎盤(pán)組織中PPARγ對(duì)MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響及其在GDM病理過(guò)程中的作用，為探索GDM胎盤(pán)的損傷機(jī)制提供重要依據(jù)。
　　方法：（1）人胎盤(pán)來(lái)源：于2014年5月-2015年5月，選取在銅陵市某婦幼保健院產(chǎn)前門(mén)診進(jìn)行常規(guī)產(chǎn)檢的孕早期單胎孕婦，排除肝腎疾病、代謝性疾病、遺傳性疾病等基礎(chǔ)性疾病的患者，以及孕前已確診患有糖尿病的患者。孕24-28周期間，對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行口服葡萄糖耐量（OGTT）試驗(yàn)，然后根據(jù)O

2、GTT的試驗(yàn)結(jié)果分組，分為正常組與GDM組。在孕婦分娩時(shí)收集胎盤(pán)樣本。（2）鼠胎盤(pán)來(lái)源：C57BL/6J小鼠120只，試驗(yàn)前動(dòng)物自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料，在光照/黑暗12h/12h、室溫（20~25）℃，濕度為（50±5）%環(huán)境中適應(yīng)1周，雌雄合籠（按照2:1的比例），第二天早晨7點(diǎn)檢查陰栓，如果檢查到陰栓則為交配成功，并規(guī)定為孕0日（GD0）。用0.1mol/L枸櫞酸鈉緩沖液配制濃度為0.25%，pH4.2的鏈脲霉素（STZ）溶液。小鼠禁食1

3、2h，在GD6、GD7、GD8連續(xù)3天按80 mg/kg的劑量腹腔內(nèi)注射 STZ溶液，采取尾靜脈血檢測(cè)血糖，2d內(nèi)血糖≥16.8mmol/L并且能穩(wěn)定3d，即為 GDM模型構(gòu)造成功。對(duì)照組小鼠腹腔注射生理鹽水，與STZ溶液等量。建模成功后GD10~GD18期間，選取小鼠36只，隨機(jī)均分成對(duì)照組、GDM組和羅格列酮組這3個(gè)組，每組各有小鼠12只。在干預(yù)期間，小鼠自由攝食和飲水，同時(shí)不使用胰島素或其他降糖藥物。在 GD10~GD18期間，羅

4、格列酮干預(yù)組給藥方案如下：羅格列酮，30 mg/kg·d p.o.。GD18處死孕鼠，取胎盤(pán)按各自測(cè)定方法做好前處理后待測(cè)。對(duì)于收集來(lái)的鼠胎盤(pán)和人胎盤(pán)樣本，采用HE染色觀察胎盤(pán)組織病理?yè)p傷情況，免疫組化法測(cè)定PPARγ、MMP-2、MMP-9的蛋白表達(dá)部位，Real-Time-PCR法檢測(cè)PPARγ、MMP-2、MMP-9的mRNA的表達(dá)水平，Western blot法檢測(cè)PPARγ、MMP-2、MMP-9的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)

5、果：(1)人胎盤(pán)與鼠胎盤(pán)HE染色結(jié)果均顯示，與對(duì)照組相比，GDM組胎盤(pán)血管分布比較紊亂，血細(xì)胞相對(duì)減少，血管壁相對(duì)較薄，而在使用羅格列酮干預(yù)后，血細(xì)胞有所增多，并且血管分布相對(duì)整齊。
　　(2)PPARγ蛋白主要表達(dá)在胎盤(pán)的絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞中，其在胎盤(pán)微絨毛膜側(cè)的表達(dá)強(qiáng)度較高；在胎盤(pán)中，MMP-2蛋白主要是在絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，絨毛間質(zhì)細(xì)胞也有少量，其在胎盤(pán)微絨毛膜側(cè)的表達(dá)強(qiáng)度較高；在胎盤(pán)中，MMP

6、-9蛋白主要是在絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、合體滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，絨毛間質(zhì)細(xì)胞也有少量存在，其在胎盤(pán)微絨毛膜側(cè)的表達(dá)強(qiáng)度較高。
　　(3)在人胎盤(pán)RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，GDM組PPARγ的mRNA的表達(dá)水平明顯有下降的趨勢(shì)（P<0.01），MMP-2、MMP-9的 mRNA表達(dá)水平上升(P<0.05)；在鼠胎盤(pán)RT-PCR實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，GDM組PPARγ的mRNA的表達(dá)水平明顯有下降的趨勢(shì)（P<0.01），MMP-2、MM

7、P-9的mRNA表達(dá)水平上升(P<0.05)；與GDM組相比，羅格列酮干預(yù)組PPARγ的mRNA表達(dá)水平上升(P<0.05)，MMP-2的mRNA表達(dá)水平下調(diào)（P<0.05），MMP-9的mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化(P>0.05)。
　　(4)在人胎盤(pán)免疫印跡試驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，GDM組PPARγ蛋白表達(dá)水平呈下調(diào)趨勢(shì)（P<0.05），MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平呈上升趨勢(shì)（P<0.05）；在鼠胎盤(pán)免疫印跡試驗(yàn)中，與對(duì)照組