蟾皮提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià).pdf

1、目的:蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)的干燥表皮中存在多種有效的化學(xué)成分統(tǒng)稱為蟾毒內(nèi)酯，該成分為一類具有相同甾體骨架的內(nèi)酯類稠環(huán)化合物，其中包括華蟾酥毒基、酯蟾毒配基和蟾毒靈。藥理學(xué)研究表明蟾毒內(nèi)脂具有抗腫瘤、強(qiáng)心、陣痛、抗炎等作用而得到廣泛研究。目前臨床常用劑型為傳統(tǒng)的片劑、口服液、膠囊和注射劑等等，但是口服片劑、膠囊劑服藥量比較大，患者順應(yīng)性差;口服液口感差具有腥臭味;注射劑刺激靜脈。

2、隨著科學(xué)的發(fā)展，新型制劑因其廣泛優(yōu)點(diǎn)得到廣泛重視，因此，研究蟾皮提取物有效成分的新型制劑，改善現(xiàn)有劑型不足很有必要。
　　固體脂質(zhì)納米粒(Solid lipid nanoparticles，SLN)是以固態(tài)的天然或合成的類脂如單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、三酰甘油等為載體，將藥物包裹于類脂核中經(jīng)不同方法制成的粒徑在50～1000nm之間的固態(tài)膠粒給藥體系。這種新型給藥載體使用無(wú)生物毒性的脂質(zhì)作為基質(zhì)，同時(shí)具備納米粒的物理穩(wěn)定性高、可控制

3、藥物釋放以及良好的靶向性等優(yōu)勢(shì)，又兼具了脂質(zhì)體、乳劑的毒性低、能大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，其發(fā)展前景非常廣闊。本課題擬從蟾皮中優(yōu)化提取有效成分，并以所提取物為原料藥物制備蟾皮提取物固體脂質(zhì)納米粒，目的是控制藥物釋放和藥物靶向、增加藥物的穩(wěn)定性和載藥量，增強(qiáng)患者對(duì)用藥的順應(yīng)性。
　　方法:建立HPLC方法測(cè)定蟾皮提取物中華蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)。優(yōu)化蟾皮提取工藝，考察干燥蟾皮浸泡時(shí)間對(duì)提取率的影響，考察水提醇沉和乙

4、醇煎煮回流方法獲得蟾皮提取物的優(yōu)劣。確定采用傳統(tǒng)的乙醇煎煮回流法后，以乙醇濃度、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)，以提取所得浸膏量及華蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合加權(quán)評(píng)分方法篩選得到最佳提取工藝，并對(duì)最優(yōu)工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。
　　對(duì)所得蟾皮提取物浸膏進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。采用薄層色譜法對(duì)提取物進(jìn)行了定性鑒別，采用HPLC方法測(cè)定提取物中華蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量。
　　在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上對(duì)油水相加入順序

5、、油相的加入方式、超生條件、乳化時(shí)間、冷卻方式、外水相分散劑的種類和濃度比例、投藥量和油相中乙醇濃度進(jìn)行處方和制備工藝的單因素考察，篩選固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，采用均勻設(shè)計(jì)優(yōu)選蟾皮提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備工藝。
　　對(duì)所得蟾皮提取物固體脂質(zhì)納米粒進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，采用顯微鏡和透射電鏡下觀察納米粒形態(tài)、測(cè)定粒徑以及測(cè)定華蟾酥毒基和酯蟾毒配基包封率和載藥量等方法評(píng)價(jià)納米粒的質(zhì)量。將制備的納米粒置于60℃、25℃、4℃，分別于0d、3d

6、、6d、12d、24 d取樣觀察并測(cè)定包封率，進(jìn)行穩(wěn)定性考察。
　　結(jié)果:華蟾酥毒基標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=36793 C+743.9（r=0.9990，n=6）。酯蟾毒配基標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=28149C+2084.5（r=0.9990，n=6）。華蟾酥毒基和酯蟾毒配基低、中、高三種濃度的日內(nèi)精密度RSD分別為2.95％、1.04％、2.92％和2.92％、3.03％、2.41％;日間精密度RSD分別為6.28％、1.96％、2.6

7、7％和6.18％、3.51％、2.78％。華蟾酥毒基和酯蟾毒配基的平均加樣回收率結(jié)果達(dá)分別為97.77％和98.31％。24h內(nèi)華蟾酥毒基峰面積的RSD值為1.079％，酯蟾毒配基峰面積的RSD值為2.836％。
　　正交試驗(yàn)篩選乙醇煎煮回流法，得到最佳提取工藝為:10倍量80％的乙醇，煎煮三次，每次20 min。
　　薄層色譜結(jié)果顯示，所得浸膏中含有華蟾酥毒基和酯蟾毒配基。蟾皮提取物浸膏中華蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量的平均值

8、分別為華蟾素毒基2.124 mg/g，酯蟾毒配基1.122 mg/g。
　　單因素試驗(yàn)中根據(jù)包封率和載藥量:油相加入到水相明顯好于水相加入油相、并且滴入高度選擇為液面上5 cm左右，緩慢滴入。超聲條件定為:功率400W、間歇20s、總4min、乳化時(shí)間為150 min。冷卻選擇先冰浴攪拌15 min然后轉(zhuǎn)移置于冰箱的冷卻方式。選用P188和吐溫-80混合分散劑（比例5∶1），納米粒穩(wěn)定性好，在顯微鏡下觀察納米粒分布均勻。采用均勻設(shè)

9、計(jì)試驗(yàn)優(yōu)選得到制備蟾皮提取物納米粒最優(yōu)處方為:ATO100mg、大豆卵磷脂300mg、藥物300 mg加入到5％P18842ml和0.5％TWeen-808ml混合分散劑中乳化150 min。
　　按優(yōu)化處方制得的固體脂質(zhì)納米粒呈乳白色，用透射電鏡觀察形態(tài)，可見(jiàn)所得粒子大小均勻，呈球形或橢球形，激光散射粒度分析儀測(cè)得平均粒徑為(138.5±4.2)nm，90％粒徑小于(208.1±27.9)nm，多分散性指數(shù)為0.143±0.02

10、3。穩(wěn)定性研究結(jié)果顯示，隨著放置溫度的升高和放置時(shí)間的延長(zhǎng)，蟾皮提取物納米粒的包封率逐漸下降，顏色由乳白色轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色，其中4℃放置24d包封率尚在80％以上。
　　結(jié)論:采用HPLC方法測(cè)定蟾皮提取物中華蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量，方法可行，專屬性好。乙醇濃度是影響蟾皮中脂溶性成分提取工藝的最主要因素，正交設(shè)計(jì)驗(yàn)證試驗(yàn)表明該方法浸膏得率很高、有效成分含量也較高，重復(fù)性也好，采用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)法優(yōu)化蟾皮脂溶性成分提取工藝合理、可行