綠色木霉的內(nèi)切葡聚糖苷酶基因的克隆與遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、資源和環(huán)境問(wèn)題是現(xiàn)代社會(huì)發(fā)展所面臨的一個(gè)重要挑戰(zhàn)。目前地球上每年光合作用的產(chǎn)物高達(dá)數(shù)億噸，其中90％以上是纖維素類(lèi)物質(zhì)，但這部分資源卻沒(méi)有得到充分的開(kāi)發(fā)利用。面臨全世界的糧食短缺、環(huán)境污染、能源危機(jī)等現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，將纖維素類(lèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可再生資源成為緩解這些問(wèn)題的一個(gè)重要手段。而纖維素酶的分子生物學(xué)與基因工程的研究發(fā)展將會(huì)加快纖維素廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的進(jìn)程，能切實(shí)提高纖維素的有效利用，通過(guò)利用纖維素酶將大量被浪費(fèi)的纖維素資源轉(zhuǎn)變?yōu)槿祟?lèi)生活所

2、需要的各類(lèi)物質(zhì)，從根本上解決全世界的危機(jī)。
　　 對(duì)纖維素酶分子的研究，對(duì)于有效利用纖維素，解決纖維素浪費(fèi)或污染，提供生物能源有很大的應(yīng)用和實(shí)用前景。
　　 內(nèi)切葡聚糖苷酶（endoglucanase，簡(jiǎn)稱EG）是纖維素復(fù)合酶中的一個(gè)重要組成部分，內(nèi)切葡聚糖苷酶主要作用于纖維素內(nèi)部的非結(jié)晶區(qū)，隨即水解B-1，4-糖苷鍵，將長(zhǎng)鏈纖維素分子截短，產(chǎn)生大量含非還原性末端的小分子纖維素。它在能源生物纖維素的有效利用方面占據(jù)著重要

3、的作用。本研究的最終目的是通過(guò)對(duì)內(nèi)切葡聚糖苷酶的改造，尋找纖維素的有效轉(zhuǎn)化途徑，有效利用大量被浪費(fèi)的纖維素資源，將纖維素降解為人類(lèi)可使用的資源。本論文從以下幾方面開(kāi)展工作，其結(jié)論如下：
　　 1.從綠色木霉菌中克隆出內(nèi)切葡聚糖苷酶，序列全長(zhǎng)為1257bp，編碼氨基酸418個(gè)，利用RT-PCR，在內(nèi)切葡聚糖苷酶中未發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子。
　　 2.通過(guò)在EGⅡ基因3′端添加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號(hào)（KDEL序列），構(gòu)建了p3300-35S-E