家蠶中β-半乳糖苷酶基因的克隆表達.pdf

1、β-半乳糖苷酶(β-D半乳糖苷半乳糖水解酶，β-D-galactosid.galatohydrofase，Ec3.2.1.23)通常被稱為乳糖酶，它能夠催化β-半乳糖苷化合物中β-半乳糖苷鍵發(fā)生水解，還具有轉半乳糖的作用。β-半乳糖苷酶催化乳糖發(fā)生水解的實用意義較大，故研究較多。β-半乳糖苷酶的天然來源十分豐富，細菌、霉菌和酵母等微生物經(jīng)發(fā)酵可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶。該酶在動物體內(nèi)參與糖類物質(zhì)的代謝并同細胞的成熟、衰老關系密切。在植物體內(nèi)能

2、夠降解細胞壁的果膠和半纖維素，參與果蔬成熟。
　　 我們通過電子克隆、RT-PCR、3'RACE的方法從家蠶幼蟲中擴增到家蠶β-半乳糖苷酶基因的cDNA序列，并將其命名為BmGal(Bomby.moriβ-galactosidase)，提交到GenBank，登錄號為FJ571146。該cDNA序列全長為215.bp，含有編碼半乳糖苷酶蛋白氨基酸序列完整的ORF，大小為182.bp，編碼606個氨基酸殘基，預測分子量為6.kD，其

3、氨基酸序列與無脊椎動物中該蛋白的氨基酸序列同源性較高，含有完整的糖基水解酶GHF-42保守結構域。本研究構建了融合蛋白表達質(zhì)粒pET-28a-B.Gal，將該重組子轉化大腸桿菌BL21(DE3)，用終濃度為0 mM的IPTG誘導重組菌后，作SDS-PAGE分析，在7.kD左右的位置有一條與預期值相符的特異性蛋白條帶。利用ONPG為底物檢測該表達產(chǎn)物，未檢出生物活性。本研究還構建了重組畢赤酵母表達載體pPIC9-γ-B.Gal，將該重組質(zhì)