幾種植物抗真菌蛋白（肽）的純化和性質(zhì)研究.pdf

1、植物源抗真菌蛋白或抗真菌肽(AFPs)種類豐富，來(lái)源廣泛，因其廣譜，無(wú)毒的特征一直受到學(xué)者的關(guān)注?？拐婢鞍椎难芯颗c農(nóng)業(yè)，食品工業(yè)密切相關(guān)。本文選取了三種我國(guó)的特色作物種子為研究材料，從中純化抗真菌蛋白或抗真菌肽，并分析其生物化學(xué)特性及抗真菌活性。首先以苦蕎種子為實(shí)驗(yàn)材料，經(jīng)提取，熱處理，Resource S陽(yáng)離子交換層析及Superdex Peptide分子篩層析，純化得到一種抗真菌肽，Tricine-SDS-PAGE顯示其表觀分子質(zhì)

2、量約為8.0 kDa，表觀純度很高。表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(SELDI-TOF)顯示其實(shí)際分子質(zhì)量為3.909 kDa。該抗菌肽對(duì)白腐菌(Panus conchatus)，綠色木霉(Trichoderma reesei)和鏈格孢霉(Alternaria alternata)等均表現(xiàn)出顯著的生長(zhǎng)抑制活性。綠色木霉的形態(tài)學(xué)分析顯示受到影響的菌絲生長(zhǎng)停滯，分支加劇，基內(nèi)菌絲端部膨大，原生質(zhì)凝縮。
　　以莜麥（裸燕麥）種子為實(shí)驗(yàn)

3、材料經(jīng)過(guò)Resource S陽(yáng)離子交換層析和superdex75凝膠排阻層析，純化得到兩種抗真菌蛋白，分別命名為α-avechin和β-avechin，其中，β-avechin的含量約為α-avechin的三倍。SDS-PAGE顯示兩種蛋白的分子量均為35 kDa左右，推測(cè)是兩種相似蛋白或是同一種蛋白的兩種修飾形式應(yīng)用固相pH梯度膠條測(cè)定β-avechin的等電點(diǎn)為8.9。兩種蛋白均對(duì)白腐菌(Panusconchatus)，綠色木霉(T

4、richoderma reesei)顯示出顯著的生長(zhǎng)抑制作用并呈現(xiàn)劑量依賴性，其中，對(duì)于綠色木霉的最低抑制量為0.21μg。膠內(nèi)酶解和串聯(lián)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的匹配結(jié)果顯示，該蛋白與莜麥種子中的幾丁質(zhì)酶具有顯著的相似性。以膠體幾丁質(zhì)為底物測(cè)定了該蛋白的幾丁質(zhì)酶活性，結(jié)果顯示該蛋白是一種幾丁質(zhì)酶，其比活力為3.59U/mg，同時(shí)測(cè)定了酶活力的最適pH和最適溫度。
　　以薏苡種子為實(shí)驗(yàn)材料，經(jīng)過(guò)Resource S陽(yáng)離子交換層析和superdex