布羅佐噴鈉對鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用及其機制.pdf

1、丁基苯酞（3-n-butylphthalide，NBP），是從芹屬植物的種子中提取的有效成分，2002年11月由國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的治療缺血性腦卒中的國家一類新藥。但存在嚴重的不良反應，如使患者血糖升高，肝功能異常以及胃腸道反應等。因此，鄭州大學化學系合成了更加安全有效的抗腦缺血的藥物：NBP類似物—布羅佐噴鈉【Sodium(±)-5-Bromo-2-(α-hydroxypentyl) benzoate，5-溴-2-（α-羥基戊

2、基）】苯甲酸鈉，商品名：Brozopine（BZP）。目前 BZP已通過Ⅰ期臨床試驗。高血壓是腦卒中最重要獨立危險因素，而高鹽飲食是高血壓重要環(huán)境因素。因此，本研究通過建立鹽敏感高血壓大鼠模型，觀察BZP對鹽敏感高血壓大鼠神經(jīng)運動功能、血壓、腦、心臟和腎臟功能等的影響，進而探究 BZP對鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用其機制。
　　第I部分：鹽敏感高血壓大鼠腦卒中模型的建立
　　目的：
　　通過高鹽飲食，建立鹽敏感高血

3、壓大鼠（Dahl-SS hypertensive rats）腦卒中模型。
　　方法：
　　12只7周齡雄性鹽敏感大鼠（Dahl-SS rats）和12只7周齡雄性SS-13BN大鼠，適應環(huán)境1周，隨機分為對照組和模型組，每組12只。其中對照組為SS-13BN大鼠，正常飲食（0.3％Salt5L79 Diet）；模型組為Dahl-SS大鼠，高鹽飲食（8%Salt AIN-76A Diet）。定期監(jiān)測血壓、體重、神經(jīng)功能評分（1

4、次/3d）。記錄大鼠的死亡率和腦卒中的發(fā)生率。48天后，檢測血漿中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量；取腦、心臟和腎臟HE染色，觀察病理學變化。
　　結(jié)果：
　　1.高鹽飲食對Dahl-SS高血壓大鼠體重的影響
　　高鹽飲食第12天，模型組大鼠體重明顯低于正常組（P<0.05）。
　　2.高鹽飲食對Dahl-SS大鼠血壓的影響
　　高鹽飲食12天，與正常組相

5、比，模型組大鼠收縮壓（SBP）、平均壓（MAP）和舒張壓（DBP）明顯高于正常范圍（P<0.01），說明高鹽飲食可誘導Dahl-SS大鼠血壓升高。
　　3.高鹽飲食對Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)運動功能的影響
　　3.1.高鹽飲食對Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)功能評分的影響
　　模型組在高鹽飲食第12天，大鼠平衡木、肌力評定、Bederson以及綜合評定等神經(jīng)功能評分升高（P<0.01）。隨著高鹽飲食的攝入時間的延長，

6、模型組大鼠運動功能障礙更加明顯，神經(jīng)功能評分顯著升高（P<0.01）。說明高鹽飲食可誘導大鼠運動功能障礙。
　　3.2.高鹽飲食后Dahl-SS高血壓大鼠腦卒中的發(fā)生率
　　根據(jù)大鼠高鹽飲食后運動功能改變情況，我們將綜合評分≥3分定義為腦卒中。高鹽飲食第12天，91.7%神經(jīng)功能綜合評分≥3分，說明高鹽飲食誘導鹽敏感高血壓大鼠腦卒中模型成功。并且隨著高鹽飲食攝入時間的延長，大鼠腦卒中的發(fā)生率逐漸增加，腦卒中癥狀也逐漸加重。<

7、br>　　4.高鹽飲食對Dahl-SS高血壓大鼠存活率的影響
　　高鹽飲食48天期間模型組大鼠存活率（66.7%）明顯下降。NBP-K9.6mg/kg組大鼠存活率明顯提高（91.7%）。結(jié)合死亡前大鼠明顯的神經(jīng)行為學異常以及死亡大鼠腦組織視交叉附近可散在梗死灶及明顯水腫等，判定腦卒中是其死亡的主要原因。
　　5.神經(jīng)學評分與血壓的相關(guān)性分析
　　模型組大鼠平衡木評分、肌力評定、Bederson評分及綜合評分與大鼠血壓均

8、顯著相關(guān)，神經(jīng)功能評分與收縮壓（SBP）相關(guān)系數(shù)分別為 R12=0.8373（P<0.01），R22=0.7418（P<0.01），R32=0.8206（P<0.01），R42=0.8166（P<0.01）；神經(jīng)功能評分與舒張壓（SDP）相關(guān)系數(shù)分別為R12=0.8577（P<0.01），R22=0.6774（P<0.01），R32=0.7998（P<0.01），R42=0.7995（P<0.01）；神經(jīng)功能評分與平均動脈壓（MAP）相

9、關(guān)系數(shù)分別為R12=0.9272（P<0.01），R22=0.8565（P<0.01）， R32=0.9260（P<0.01），R42=0.9207（P<0.01）。
　　6.高鹽飲食對Dahl-SS大鼠臟器的損傷作用
　　模型組腦組織細胞體積縮小，細胞核固縮，胞質(zhì)透亮，著色變淺，且不均勻，出現(xiàn)許多空泡，嚴重者出現(xiàn)核破碎，細胞排列疏松紊亂，間隙變大；腎小球萎縮、消失；纖維化、硬化和玻璃樣變性；間質(zhì)纖維組織增生和炎癥細胞浸潤；

10、心肌細胞排列紊亂、細胞間隙明顯增大，肌纖維有斷裂，細胞核排列不整齊大小不均一。說明高鹽飲食可造成大鼠腦、心臟和腎臟等重要臟器的損傷。
　　7.高鹽飲食對Dahl-SS高血壓大鼠氧化應激水平的影響
　　與對照組相比，模型組大鼠高鹽飲食后血漿中CAT活性和GSH-PX活性顯著降低（P<0.01），NO含量顯著升高（P<0.01），說明高鹽飲食使大鼠使機體抗氧化能力減退。
　　結(jié)論：
　　高鹽飲食可誘導鹽敏感高血壓大鼠

11、腦卒中的形成。
　　第II部分：布羅佐噴鈉對鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用及其機制
　　目的：
　　探究布羅佐噴鈉（Brozopine, BZP）對鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的防治作用，從而為臨床應用提供相關(guān)依據(jù)。
　　方法：
　　72只7周齡雄性鹽敏感大鼠和12只7周齡雄性SS-13BN大鼠，適應環(huán)境1周，隨機分為正常組、模型組、BZP（0.75，3，12 mg/kg）組、Br-NBP10.5 mg/kg組

12、和NBP-K9.6 mg/kg組，每組12只。對照組給予正常飲食（SS-13BN大鼠，0.3%Salt5L79 Diet）和其余劑量組給予高鹽飲食（Dahl/SS rats，8% Salt AIN-76A Diet）。其中BZP12 mg/kg與Br-NBP10.5 mg/kg、NBP-K9.6 mg/kg為等摩爾劑量。高鹽飲食2周開始給藥，給藥方式為尾靜脈注射，每天一次，連續(xù)4周，正常組和模型組給予等體積的生理鹽水。在此期間監(jiān)測血壓、

13、體重和神經(jīng)功能評分，每7天測一次。并記錄大鼠腦卒中的發(fā)生率和大鼠的存活率。給藥28天后，檢測血漿中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量；取腦、心臟和腎臟HE染色，觀察病理學變化。
　　結(jié)果：
　　1.BZP可增加Dahl-SS高血壓大鼠體重
　　高鹽飲食3周后，模型組大鼠與正常組相比體重明顯降低（P<0.01）。與模型組相比，給藥第14天，BZP12 mg/kg組大鼠體重

14、顯著增加（P<0.01）。
　　2.BZP并不引起Dahl-SS高血壓大鼠血壓的降低
　　高鹽飲食2周后（給藥前一天），與正常組相比，模型組收縮壓（SBP）、平均壓（MAP）和舒張壓（DBP）明顯高于正常范圍（P<0.01）。說明高鹽飲食可誘導鹽敏感大鼠血壓升高。與模型組相比，BZP12 mg/kg組血壓僅在給藥第21天時稍降低（P<0.05，P<0.01），說明BZP不是降壓藥物，且并不通過降壓作用而對鹽敏感高血壓大鼠腦卒

15、中具有防治作用。
　　3.BZP對Dahl-SS高血壓大鼠神經(jīng)運動功能的影響
　　3.1.運動功能評分
　　高鹽飲食2周，大鼠均出現(xiàn)不同程度的運動協(xié)調(diào)功能障礙，平衡木評定、肌力評定、Bederson以及綜合評定等神經(jīng)功能評分升高（P<0.01）。模型組隨著高鹽飲食攝入時間的延長，運動協(xié)調(diào)功能障礙明顯加重，評分顯著增加（P<0.01）。給藥第7天，與模型組相比，BZP12 mg/kg組大鼠運動功能障礙得到顯著改善，神經(jīng)功

16、能評分明顯降低（P<0.05）；給藥第14天后，BZP（0.75，3，12 mg/kg）組均可改善大鼠運動功能障礙，神經(jīng)功能評分明顯降低（P<0.05，P<0.01）且呈現(xiàn)劑量依賴性。給藥第21天后，BZP12 mg/kg組改善大鼠運動功能障礙優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg組和Br-NBP10.5 mg/kg組。
　　3.2.BZP可降低Dahl-SS高血壓大鼠腦卒中的發(fā)生率
　　根據(jù)大鼠的運動功能損傷情況，綜合評分≥3分

17、則被認為該大鼠已形成腦卒中。高鹽飲食第7天，模型組有83.3%的大鼠發(fā)生腦卒中。而BZP（0.75，3，12 mg/kg）組在給藥第7天腦卒中發(fā)生率與模型組相比明顯下降（58.3%，58.3%，16.7% vs83.3%）且呈現(xiàn)劑量依賴性。且BZP12 mg/kg降低大鼠腦卒中發(fā)生率效果優(yōu)于Br-NBP10.5 mg/kg組和NBP-K9.6 mg/kg組。
　　4.BZP可提高Dahl-SS高血壓大鼠的存活率
　　高鹽飲食

18、期間，模型組大鼠存活率為58.3%，BZP（0.75，3，12 mg/kg）組大鼠存活率分別為83.3%，91.7%，100%。說明BZP能劑量依賴性地顯著提高大鼠存活率。結(jié)合死亡前大鼠明顯的神經(jīng)行為學異常以及死亡大鼠腦組織視交叉附近可散在梗死灶及明顯水腫等，判定腦卒中是其死亡的主要原因。與模型組相比，BZP（0.75，3，12mg/kg）組大鼠存活時間明顯延長【（41.25±2.05）天、（41.25±2.60）、）天、（42±0）天

19、 vs（39.42±4.54）天】。
　　5.BZP可提高CAT、GSH-PX的活性，降低NO的含量
　　與正常組相比，模型組大鼠高鹽飲食后血漿中 CAT活性（P<0.01）和GSH-PX活性顯著下降（P<0.01），NO含量顯著升高（P<0.01），說明高鹽飲食可使機體抗氧化能力減弱；與模型組相比，BZP12mg/kg可顯著增加CAT的活性（P<0.05）和GSH-PX的活性（P<0.01）；BZP（3，12mg/kg）組

20、可顯著降低NO的含量（P<0.01），且呈現(xiàn)劑量依賴性；說明BZP可提高機體抗氧化能力，且BZP12mg/kg組提高機體抗氧化能力效果優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg組和Br-NBP10.5 mg/kg組。
　　6.組織形態(tài)學改變
　　模型組大鼠腦細胞體積縮小，細胞核固縮，核質(zhì)比減小，胞質(zhì)透亮，著色變淺，不均勻，出現(xiàn)許多空泡，嚴重者核破碎，細胞排列疏松紊亂，間隙變大；腎小球萎縮、消失；纖維化、硬化和玻璃樣變性；間質(zhì)纖維組織增

21、生和炎癥細胞浸潤；心肌細胞排列紊亂、細胞間隙明顯增大，肌纖維有斷裂，細胞核排列不整齊，不均一。BZP（0.75，3，12 mg/kg）組可顯著減輕腦、心、腎等重要臟器的；效果優(yōu)于NBP-K9.6 mg/kg與Br-NBP10.5 mg/kg組。表明BZP對鹽敏感高血壓大鼠所致腦，心臟和腎臟的損傷具有保護作用。
　　結(jié)論：
　　BZP對鹽敏感高血壓大鼠腦卒中的有顯著防治作用。
　　1. BZP可顯著改善鹽敏感高血壓大鼠腦