bFGF刺激NF-κB活化誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞對貝伐珠單抗耐藥.pdf

1、目的：探索堿性成纖維生長因子（bFGF）是否可誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞對貝伐珠單抗耐藥及其作用機(jī)制。
　　方法：1、探索堿性成纖維因子（ bFGF）是否可誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞對貝伐珠單抗耐藥。實(shí)驗(yàn)分為三組：正常對照組、藥物組、實(shí)驗(yàn)組。a、正常對照組為人胃癌MGC-803細(xì)胞；b、藥物組為貝伐珠單抗（22ng/ml）處理人胃癌MGC-803細(xì)胞12小時(shí)；c、實(shí)驗(yàn)組為bFGF（30ng/ml）處理人胃癌MGC-803細(xì)胞1

2、2小時(shí)后，再予以貝伐珠單抗（22ng/ml）處理12小時(shí)。CCK-8法檢測人胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖抑制情況。
　　2、探索bFGF誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞對貝伐珠單抗耐藥的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為三組：實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組、陽性對照組。a、實(shí)驗(yàn)組為bFGF（30ng/ml）預(yù)處理人胃癌MGC-803細(xì)胞12小時(shí)，再予以貝伐珠單抗（22ng/ml）處理12小時(shí)；b、陰性對照組為bFGF（30ng/ml）預(yù)處理人胃癌MGC-803細(xì)胞1

3、2小時(shí)，加入NF-κB抑制劑二硫氨基甲酸酞吡咯烷（PDTC）（10μmol/L）處理30分鐘，再加入貝伐珠單抗（22ng/ml）作用12小時(shí)；c、陽性對照組為NF-κB激動劑腫瘤壞死因子α（TNF-α）（30ng/ml）預(yù)處理人胃癌MGC-803細(xì)胞30分鐘，再加入貝伐珠單抗（22ng/ml）作用12小時(shí)。Western Blot法檢測MGC-803細(xì)胞核內(nèi)及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)NF-κB蛋白的表達(dá)情況；用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察NF-κB核轉(zhuǎn)位（活化）

4、情況。
　　結(jié)果：1、藥物組經(jīng)貝伐珠單抗處理12小時(shí)后，人胃癌MGC-803細(xì)胞的相對活力明顯下降，貝伐珠單抗可抑制人胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖。而經(jīng)bFGF預(yù)處理12小時(shí)后，人胃癌MGC-803細(xì)胞的相對活力較藥物組明顯增加，其對貝伐珠單抗的敏感性明顯下降；
　　2、經(jīng)bFGF預(yù)處理12小時(shí)的人胃癌MGC-803細(xì)胞，在NF-κB抑制劑PDTC的作用下，細(xì)胞的相對活力較單純bFGF處理12小時(shí)的細(xì)胞明顯下降，細(xì)胞對貝伐珠

5、單抗的敏感性明顯增加，PDTC可逆轉(zhuǎn) bFGF誘導(dǎo)人胃癌 MGC-803細(xì)胞對貝伐珠單抗耐藥；經(jīng) NF-κB激動劑TNF-α處理30分鐘后，人胃癌MGC-803細(xì)胞的相對活力較單純貝伐珠單抗處理12小時(shí)的細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞對貝伐珠單抗的敏感性明顯下降；
　　3、經(jīng)bFGF預(yù)處理12小時(shí)后的細(xì)胞及經(jīng)NF-κB激動劑TNF-α預(yù)處理30分鐘后的細(xì)胞核內(nèi)的 NF-κB蛋白表達(dá)較單純貝伐珠單抗處理12小時(shí)的細(xì)胞明顯增加，而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的 NF

6、-κB蛋白的表達(dá)則恰好相反，bFGF與TNF-α一樣，可誘導(dǎo)NF-κB活化（核轉(zhuǎn)位）；經(jīng)bFGF預(yù)處理12小時(shí)的人胃癌MGC-803細(xì)胞，在NF-κB抑制劑PDTC作用30分鐘后，細(xì)胞核內(nèi)的NF-κB蛋白的表達(dá)較單純bFGF處理12小時(shí)的細(xì)胞明顯下降，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的 NF-κB蛋白表達(dá)則明顯增加，PDTC可逆轉(zhuǎn)bFGF誘導(dǎo)NF-κB活化（核轉(zhuǎn)位）；
　　4、經(jīng)bFGF處理12小時(shí)的細(xì)胞及經(jīng)NF-κB激動劑TNF-α處理30分鐘的細(xì)胞胞