姜黃素聯(lián)合L-FP對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：姜黃素(curcumin,CUR)是中藥姜黃的主要活性成分，是一種脂溶性酚類色素，具有抗腫瘤、抗炎癥、抑制突變等多種作用。小劑量順鉑（DDP）與5-氟尿嘧啶（5-FU）聯(lián)合用藥（L-FP）是臨床上治療胃癌的常用化療方案。本文旨在探討姜黃素聯(lián)合 L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌 MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、遷移和凋亡的影響及其機(jī)制，為臨床上聯(lián)合應(yīng)用姜黃素和L-FP治療胃癌提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物

2、學(xué)的研究技術(shù)與方法，觀察姜黃素和/或不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成、遷移、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的作用以及對(duì)相關(guān)調(diào)控蛋白 Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的影響。主要觀察指標(biāo)及方法如下：
　　1. MTT實(shí)驗(yàn)：用姜黃素和/或不同劑量的L-FP分別處理96孔板培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞24h、48h和72h后，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)每孔細(xì)胞的OD值，并計(jì)算細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。

3、>　　2.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)：用姜黃素和/或不同劑量的 L-FP處理6孔板培養(yǎng)的MGC-803細(xì)胞，24h后換不含藥物的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)10天，吉姆薩染色后計(jì)數(shù)并計(jì)算克隆形成率。
　　3. Transwell遷移實(shí)驗(yàn)：用含有姜黃素和/或不同劑量的L-FP的培養(yǎng)液培養(yǎng)Transwell小室中的胃癌MGC-803細(xì)胞，10h后，MTT方法檢測(cè)并計(jì)算遷移率。
　　4. AO/EB雙染法：用姜黃素和/或不同劑量的 L-FP處理6孔板培養(yǎng)

4、的MGC-803細(xì)胞24h后，AO/EB雙染在熒光顯微鏡下拍照，觀察細(xì)胞形態(tài)、計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)并計(jì)算凋亡率。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)：姜黃素和/或不同劑量的 L-FP處理6孔板培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞24h后，用PI單染方法檢測(cè)細(xì)胞周期；用Annexin V-FITC/PI雙染方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　6.酶標(biāo)儀比色法：用姜黃素和/或不同劑量的 L-FP處理6孔板培養(yǎng)的MGC-803細(xì)胞24h后，用酶標(biāo)儀比色法檢測(cè)Caspase

5、-3和Caspase-8的活性，并計(jì)算其相對(duì)活性。
　　7. Western blot方法：用姜黃素和/或不同劑量的L-FP處理6孔板培養(yǎng)的MGC-803細(xì)胞24h后，提取總蛋白，用Western blot法檢測(cè)Bax和Bcl-2的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：用姜黃素和/或不同劑量的L-FP處理胃癌MGC-803細(xì)胞24h、48h和72h后，與對(duì)照組相比，各

6、實(shí)驗(yàn)組均表現(xiàn)出了顯著的抑制生長(zhǎng)效應(yīng)（*P<0.05或**P<0.01或***P<0.001）；其中藥物處理24h和72h的抑制率，姜黃素聯(lián)合低劑量 L-FP組與中劑量 L-FP組相比和姜黃素聯(lián)合中劑量L-FP組與高劑量L-FP組相比，無(wú)顯著性差異（P>0.05）；而48h的抑制率，姜黃素聯(lián)合L-FP組顯著高于姜黃素或L-FP單用組（*P<0.05）。
　　2.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞克隆形成的

7、影響：與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的克隆形成能力均顯著下降（*P<0.05）；并且姜黃素聯(lián)合L-FP組抑制率顯著高于姜黃素或L-FP單用組（*P<0.05）。
　　3.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞遷移的影響：與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組通過(guò) Transwell小室的細(xì)胞量明顯降低(*P<0.05或**P<0.01)；其中姜黃素聯(lián)合L-FP組遷移率與姜黃素或L-FP單用組無(wú)顯著差異（P>0.05）。

8、　　4.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞周期的影響：與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組主要阻滯細(xì)胞于S期(*P<0.05)，而且姜黃素聯(lián)合 L-FP組細(xì)胞在 S期所占比例顯著高于姜黃素或 L-FP單用組（*P<0.05）。
　　5.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡的影響：與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組均能顯著誘導(dǎo) MGC-803細(xì)胞發(fā)生凋亡（*P<0.05），其中姜黃素聯(lián)合L-FP組的凋

9、亡率顯著高于姜黃素或L-FP單用組（*P<0.05），并且Annexin-V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)的各組細(xì)胞凋亡率與 AO/EB雙染熒光顯微鏡檢測(cè)的各組細(xì)胞凋亡率沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。
　　6.姜黃素聯(lián)合不同劑量的L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞相關(guān)調(diào)控蛋白的影響：與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞顯著增強(qiáng)了 Bax的表達(dá)，降低了Bcl-2的表達(dá)，提高了 Caspase-3和Caspase-8的活性(*P<0.05或*

10、*P<0.01)；除了姜黃素聯(lián)合中劑量 L-FP組的 Bax相對(duì)表達(dá)量與高劑量L-FP單用組無(wú)顯著差異（P>0.05），其余姜黃素聯(lián)合L-FP組的Bax相對(duì)表達(dá)量顯著高于姜黃素或L-FP單用組，Bcl-2相對(duì)表達(dá)量顯著低于姜黃素或 L-FP單用組(*P<0.05或**P<0.01)；姜黃素聯(lián)合低劑量 L-FP組的Caspase-3和 Caspase-8相對(duì)活性與中劑量 L-FP單用組無(wú)顯著差異（P>0.05），而姜黃素聯(lián)合中劑量L-FP

11、組的Caspase-3和Caspase-8相對(duì)活性顯著高于高劑量L-FP單用組(*P<0.05或**P<0.01)。
　　結(jié)論：1.姜黃素能增強(qiáng)L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。
　　2.姜黃素能增強(qiáng)L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞克隆形成和遷移能力的抑制作用。
　　3.姜黃素能增強(qiáng)L-FP對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌MGC-803細(xì)胞周期中S期的阻滯作用。
　　4.姜黃素能增強(qiáng) L-FP對(duì)