毛蘭素聯(lián)合5-Fu對人胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察毛蘭素（Erianin）與5-Fu單藥及聯(lián)合用藥對胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖、凋亡的影響，并探討兩藥是否可通過調(diào)控Bax、Bcl-2、Caspase-3基因的表達(dá)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡,為尋找胃癌新藥或優(yōu)化5-Fu化療方案提供新的理論依據(jù)。
　　方法（：1）以胃癌細(xì)胞株MGC-803為研究對象，用不同濃度的Erianin（0.977-250ng/ml）及5-Fu（781.250-200000ng/ml）處理胃癌細(xì)胞不同時間（

2、24h，48h，72h），CCK-8法檢測吸光值并計算抑制率；（2）分別用五個不同濃度的 Erianin和5-Fu單藥及固定比例聯(lián)合(Erianin0.977ng/ml+5-Fu781.250ng/ml,Erianin3.906ng/ml+5-Fu3125ng/ml,Erianin15.625ng/ml+5-Fu12500ng/ml,Erianin62.500ng/ml+5-Fu50000ng/ml, Erianin250ng/ml+5

3、-Fu200000ng/ml)處理胃癌細(xì)胞48h，利用中效原理計算單藥組與聯(lián)合組 IC50濃度及聯(lián)合用藥指數(shù)（CI）；（3）根據(jù)中效原理計算出聯(lián)合組IC50濃度為4329.044ng/ml（Erianin5.404ng/ml+5-Fu4323.640ng/ml），用此濃度作為后續(xù)所有實驗濃度且均處理48h，各實驗設(shè)單藥組（Erianin5.404ng/ml、5-Fu4323.640ng/ml）、聯(lián)合組（Erianin5.404ng/ml

4、+5-Fu4.324ug/ml）、對照組；（4）流式技術(shù)檢測細(xì)胞周期阻滯情況；（5)AO/EB染色觀察細(xì)胞凋亡現(xiàn)象；（6）RT-PCR及Western Blot檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）Erianin及5-Fu單藥隨藥物濃度增大及作用時間延長抑制胃癌細(xì)胞增殖作用增強(qiáng)（p＜0.05）。由中效原理計算可知，兩藥小劑量聯(lián)合時聯(lián)合指數(shù)（CI）＞1，大劑量聯(lián)合時聯(lián)合指數(shù)（CI）＜1；（2）流式

5、技術(shù)可知Erianin主要阻滯胃癌細(xì)胞于G2/M期，5-Fu主要阻滯胃癌細(xì)胞于S期，聯(lián)合用藥時被阻滯于S期的細(xì)胞較單用5-Fu時少，被阻滯于G2/M期的細(xì)胞較單用Erianin時少；（3）AO/EB染色發(fā)現(xiàn)，單藥組細(xì)胞凋亡現(xiàn)象較對照組明顯，而聯(lián)合組細(xì)胞凋亡現(xiàn)象又較單藥組明顯；（4） RT-PCR證實兩藥均可使胃癌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因 Bax、Bcl-2、Caspase-3的mRNA出現(xiàn)表達(dá)，Western Blot進(jìn)一步證實兩藥可增加Bax

6、、Caspase-3，減少Bcl-2蛋白的表達(dá)，聯(lián)合用藥時增加Bax、Caspase-3，減少Bcl-2蛋白表達(dá)的作用較單藥組明顯（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）一定濃度范圍內(nèi)Erianin及5-Fu對胃癌細(xì)胞的抑制作用呈時間及濃度依賴性；
　?。?）兩藥小劑量聯(lián)合時具有拮抗作用，大劑量聯(lián)合時具有協(xié)同作用；
　　(3）Erianin及5-Fu可通過調(diào)控Bax、Bcl-2、Caspase-3因子的表達(dá)促進(jìn)