背側紋狀體GABAAα1亞基在ATS成癮機制中的研究.pdf

1、目的:
　　1.研究GABAAα1參與甲基苯丙胺(Methamphetamine，METH)成癮相關獎賞記憶的機制;
　　2.研究miRNA和泛素化系統(tǒng)通過調控GABAAα1表達，參與METH成癮相關獎賞記憶的機制。
　　方法:
　　采用代表 METH成癮相關獎賞記憶的條件位置偏愛的大鼠動物模型（Conditioned place preference，CPP)作為研究工具，圍繞在中樞神經系統(tǒng)起主要抑制性作用的G

2、ABAA受體展開研究，特別聚焦于在神經中樞分布最廣泛的含有α1的GABAA受體。
　　結果:
　　一、GABAAα1參與了METH成癮相關獎賞記憶機制的形成
　　在使用METH制作 CPP模型以后,western blot結果發(fā)現只有背側紋狀體（Dorsal striatum，Dstr）的GABAAα1蛋白表達下調，Real-Time PCR顯示GABAAα1 mRNA的表達水平沒有變化。其他四個腦區(qū)（內側前額葉皮層、

3、伏隔核、杏仁核、背側海馬）的GABAAα1蛋白表達沒有改變，其它一些常見 GABAA亞型（GABAAα2、GABAAα3、GABAAα5、GABAAβ2）蛋白表達也沒有改變。進一步，我們向雙側Dstr微注射GABAA受體激動劑muscimol或專一性針對α1GABAA受體的激動劑zolpidem都可以明顯減弱METH誘發(fā)的CPP的形成。我們的發(fā)現提示Dstr的GABAAα1在METH獎賞記憶形成中具有非常重要的作用。
　　二、ME

4、TH成癮過程中，泛素化連接酶SYVN1參與調控了GABAAα1的下調
　　我們先后從miRNA和泛素化的角度研究影響GABAAα1下調的因素：在miRNA的研究中，我們首先用生物信息學軟件、文獻報道和前期的芯片研究結果預測了21個最有可能調控GABAAα1的miRNA，然后用Real-Time PCR的方法進行篩查，但是沒有篩查出調控GABAAα1的miRNA，提示METH-CPP大鼠Dstr的GABAAα1的表達下調，可能不是由

5、miRNA參與調控的。
　　在泛素化的研究中，我們發(fā)現泛素化過程參與了 METH-CPP的形成和GABAAα1的表達下調，更深入的研究發(fā)現泛素化連接酶SYVN1參與了這個過程，我們用免疫共沉淀實驗和原代紋狀體神經元的慢病毒干擾實驗均證實 SYVN1參與調控了GABAAα1的表達下調。提示抑制SYVN1誘導的GABAAα1降解，是改善METH成癮導致的GABAAα1下調的有效途徑。
　　結論:
　　Dstr的GABAAα