蛋白激酶Cβ基因單核苷酸多態(tài)性及血漿表達水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關性研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種以多種自身抗體產生和多器官損害為特征的自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)復雜，病程遷延反復，對患者身心健康造成較大影響，已成為一個重要的公共衛(wèi)生問題。已有研究表明SLE的發(fā)生與 T、B淋巴細胞的高度活化、免疫球蛋白增多等機體的免疫異常有關，其中以 B細胞增殖分化和功能異常最為突出。B細胞通過產生大量的自身抗體介導組織和器官損傷，遞呈抗原給自身反應性

2、 T細胞，以及產生可溶性介質觸發(fā)、維持炎癥反應，參與SLE發(fā)病機制的多個環(huán)節(jié)。
　　核轉錄因子κB（nuclear factorκB，NF-?B）是參與細胞內信號轉導的重要轉錄因子，對T細胞的活化、增殖以及調節(jié)B細胞免疫球蛋白基因的表達起著關鍵作用。已有證據顯示，B細胞受體（B cell receptor, BCR）介導的NF-?B信號通路的激活參與了SLE的發(fā)病。蛋白激酶C（protein kinase Cβ, PKCβ）是BC

3、R介導的NF-?B信號通路中的關鍵因子，可以通過BCR介導的NF-?B信號通路的激活，對成熟B細胞的存活起重要作用。B淋巴細胞瘤xL（B-cell lymphoma xL，Bcl-xL）和B淋巴細胞瘤2（B-cell lymphoma2，Bcl-2）是Bcl-2蛋白家族的兩個成員，均具有抑制細胞凋亡的作用。已有研究表明NF-?B可以誘導抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL等表達失調，PKCβ缺陷的B細胞存活時間短也與Bcl-2、Bcl-x

4、L的表達失調有關。同時，Bcl-2、Bcl-xL還可以通過影響B(tài)細胞功能造成大量自身免疫性抗體堆積，參與SLE的發(fā)病過程。
　　目前已有在中國華中、華南地區(qū)4199例SLE病人和8255例健康對照中的研究表明，PKCβ基因多態(tài)性位點rs16972959與SLE遺傳易感性相關，但缺少在皖籍漢族人群中的報道，且未研究rs16972959基因頻率與SLE相關臨床表現(xiàn)、實驗室指標等疾病特征之間的關系。因此，本研究擬分析皖籍漢族SLE患者及

5、健康對照者PKCβ基因多態(tài)性位點rs16972959與SLE遺傳易感性之間的關聯(lián)。同時，采用ELISA方法檢測SLE患者和健康對照中PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達水平，比較兩組間差異，探討三者血漿表達水平之間的關系，并結合臨床特征，分析PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達水平與SLE疾病活動度及不同臨床表現(xiàn)和實驗室指標之間的關系。
　　第一部分蛋白激酶Cβ基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關聯(lián)性研究
　　

6、目的：比較 SLE患者和健康對照 PKCβ基因單核苷酸多態(tài)性位點（rs16972959）基因型和等位基因頻率的差異，探討其與SLE遺傳易感性的關系。同時結合臨床特征，分析其與SLE主要臨床表現(xiàn)和實驗室指標之間的關系。
　　方法：本研究共納入SLE病例400例，均來自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風濕免疫科，診斷標準符合美國風濕病學會1997年修訂的SLE分類標準。納入健康對照400例，來自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院健康體檢中

7、心健康志愿者。采用 TaqMan探針基因分型技術檢測 SLE病例組和健康對照組 PKCβ基因位點rs16972959的基因型和等位基因頻率，結果采用SPSS10.01軟件進行統(tǒng)計分析，使用χ2檢驗或確切概率法比較SLE病例組和健康對照組基因型和等位基因頻率的分布差異。檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　　(1)哈迪-溫伯格檢驗：對照組基因分型的結果符合哈迪-溫伯格平衡（χ2=1.523， P=0.217）。
　　(2

8、) PKCβ（rs16972959）基因分型：SLE患者組rs16972959位點基因A/A, A/G和G/G的基因型頻率分別為3.75％,33.75%和62.50%，對照組分別為8.00%,36.75%和55.25%，兩組基因型的分布差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=13.816， P<0.001）。對兩組間等位基因頻率進行比較發(fā)現(xiàn)， PKCβ-34277227A/G（rs16972959）最小等位基因 A的基因頻率在 SLE病例組和對照組間

9、分別為20.63%和26.37%，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=7.356，P=0.007)。
　　(3)基因分型與主要臨床癥狀的關聯(lián)：rs16972959基因位點A/A, A/G和G/G的基因型分布與蝶形紅斑、盤狀紅斑、光敏感、口腔潰瘍、關節(jié)炎、漿膜炎、腎臟病變和血液學異常均無統(tǒng)計學關聯(lián)（均有P＞0.05）。
　　(4)基因分型與主要實驗室指標的關系：rs16972959基因位點A/A, A/G和G/G的基因型分布與抗核抗體、

10、抗雙鏈DNA抗體、抗Sm抗體、抗SSA抗體、抗SSB抗體和抗核糖核蛋白抗體之間均無統(tǒng)計學關聯(lián)（均有P＞0.05）。而rs16972959基因型分布在抗核糖體 P蛋白抗體陽性組和陰性組之間的差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.361，P=0.042）。
　　結論：該研究人群中 PKCβ基因單核苷酸多態(tài)性（rs16972959）與 SLE的遺傳易感性有關，rs16972959位點的G等位基因與該人群SLE的發(fā)病風險升高有關。
　　第二部

11、分蛋白激酶Cβ血漿表達水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的相關性研究
　　目的：比較SLE病例組與健康對照組、SLE腎炎組與非腎炎組以及活動期SLE病例與非活動期SLE病例之間血漿PKCβ，Bcl-xL和BCL-2表達水平的差異，分析PKCβ，Bcl-xL和BCL-2表達水平之間的相關性以及三者表達水平與SLE臨床表現(xiàn)和實驗室指標之間的關系。
　　方法：選取80例安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院和附屬省立醫(yī)院風濕免疫科確診的SLE患者作為病例

12、組，收集一般情況、臨床資料和實驗室資料。所有的患者均符合1997年修訂的SLE分類標準。選取80例安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院健康體檢中心健康志愿者作為對照組，收集一般情況資料。采用 ELISA試劑盒分別檢測PKCβ、Bcl-xL和BCL-2的血漿表達水平。采用兩獨立樣本t檢驗比較分析病例組與對照組PKCβ、Bcl-xL和BCL-2血漿表達水平之間的差異。使用SPSS10.01軟件進行統(tǒng)計學分析，檢驗水準α=0.05。
　　結果：

13、r>　　(1) SLE病例組和健康對照組血漿中PKCβ的表達水平差異無統(tǒng)計學意義（t=0.62， P=0.535）；SLE病例組 Bcl-xL血漿表達水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(t=6.00, P<0.001)；Bcl-2在SLE病例組中的血漿表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(t=2.18, P=0.031)。
　　(2) SLE病例組和對照組血漿中PKCβ表達水平與Bcl-xL和Bcl-2表達水平之間均無統(tǒng)計學關聯(lián)（均

14、有P＞0.05），SLE病例組中Bcl-xL與Bcl-2血漿表達水平之間也無統(tǒng)計學關聯(lián)（rs=0.035，P=0.820），而對照組Bcl-xL與Bcl-2血漿表達水平呈負相關（rs=-0.342，P=0.007）。
　　(3) SLE相應臨床表現(xiàn)陽性組與陰性組之間PKCβ、Bcl-xL和Bcl-2血漿表達水平差異均無統(tǒng)計學意義（均有P＞0.05）。
　　(4) SLE不同實驗室指標與PKCβ和Bcl-2血漿表達水平之間均無