SOCS1基因單核苷酸多態(tài)性及其mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupuseryth ematosus,SLE)是一種典型的自身免疫性疾病,患者體內(nèi)存在自身反應(yīng)T、B淋巴細(xì)胞的過度活化,細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡和細(xì)胞凋亡紊亂等多種免疫異常,從而導(dǎo)致大量致病性的自身抗體和免疫復(fù)合物的產(chǎn)生,引起多系統(tǒng)和多器官損害。SLE患者病死率較高,生存質(zhì)量較差。目前廣泛認(rèn)為其發(fā)病與遺傳因素、免疫異常、病毒感染、藥物及激素等因素有關(guān)。細(xì)胞因子信號(hào)抑制蛋白(suppress orso

2、f cytokine signaling,SOCS)有8個(gè)家族成員,其中SOCS1在免疫反應(yīng)過程中對(duì)細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)反饋?zhàn)饔糜葹橥怀?。最近的?bào)導(dǎo)顯示,在掃描368個(gè)編碼SOCS和細(xì)胞因子/受體的55個(gè)基因(簇)的單核苷酸多態(tài)性(single-nucleotidepolymorphisms,SNPs)中發(fā)現(xiàn),得分最高的是編碼SOCS1基因SNPrs243324,并確定其為自身免疫性疾病的危險(xiǎn)因素。但該基因單核苷酸多態(tài)性及其信使RNA(

3、messengerRNA,mRNA)的表達(dá)在中國(guó)漢族人群中是否也與SLE存在一定的關(guān)系尚不得而知。
　　細(xì)胞因子是類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì),在免疫細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化及免疫調(diào)節(jié)中,發(fā)揮著細(xì)胞信號(hào)傳遞的作用。細(xì)胞因子通過各種信號(hào)通路參與SLE的發(fā)病機(jī)制。其中Janus蛋白酪氨酸激酶(Janusprotein-tyrosinekinase,JAK)/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signaltransducerandactivator

4、oftranscription,STAT)信號(hào)通路(簡(jiǎn)稱JAK/STAT信號(hào)通路)是繼Ras途徑之后出現(xiàn)的又一重要的細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,大多數(shù)細(xì)胞因子主要通過JAK/STAT信號(hào)通路發(fā)揮其生物學(xué)功能,JAK/STAT信號(hào)通路參與了細(xì)胞因子在促進(jìn)免疫細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、介導(dǎo)炎性反應(yīng)等生物學(xué)作用。而細(xì)胞因子通過JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抑制因子(suppressorsofcytokinesignaling,S

5、OCS)的表達(dá),繼而反饋性抑制細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。SOCS1、SOCS2和SOCS3和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的含SH2區(qū)域蛋白(cytokine-inducibleSH2containingprotein,CIS)能夠在免疫系統(tǒng)表達(dá)并通過負(fù)向調(diào)節(jié)各種細(xì)胞因子信號(hào)途徑來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。
　　因此,本研究通過收集SLE患者及正常對(duì)照的血液標(biāo)本,采用病例對(duì)照研究,探討SOCS1基因多態(tài)性與SLE的疾病易感性之間的關(guān)聯(lián);同時(shí),檢測(cè)了SOCS1基因mRN

6、A表達(dá)水平,并結(jié)合臨床特征,分析SOCS1基因mRNA表達(dá)水平與SLE疾病活動(dòng)度及不同臨床特征之間的關(guān)系,并分析了基因多態(tài)性與mRNA表達(dá)水平的關(guān)系,研究分為兩個(gè)部分。
　　第一部分:SOCS1基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的:比較SLE患者和正常對(duì)照SOCS1(rs243324)的基因型頻率和等位基因頻率,探討其與中國(guó)漢族人群SLE易感性的關(guān)系,同時(shí)結(jié)合臨床資料分析其與SLE主要臨床特征之間的關(guān)系。

7、　　方法:病例共445例,來自兩所三甲醫(yī)院的SLE住院和門診病例,病例均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn);健康對(duì)照526例,來自健康體檢中心和健康獻(xiàn)血員均排除SLE和其它自身免疫疾病。收集研究對(duì)象的一般情況和病例的相關(guān)臨床資料,采集所有研究對(duì)象的外周靜脈血,提取DNA凍存。利用ABI7300PCR儀,采用TaqMan探針基因分型技術(shù),檢測(cè)SOCS1基因一個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性;比較SLE病例組和對(duì)照組中多態(tài)位點(diǎn)的基因型和等位基因

8、頻率分布是否存在差異,用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果:
　　(1)哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinvergequilibriun,HWE)檢驗(yàn):位點(diǎn)rs243324基因型分布在病例組與對(duì)照組均達(dá)到遺傳平衡。(病例:c2=0.444,P=0.505;對(duì)照:c2=2.687,P=0.101)。
　　(2)SOCS1基因分型:位點(diǎn)rs243324三種基因型A/A、A/G、G/

9、G的頻率在病例組和對(duì)照組中分別為7.2％、41.6%、51.2%和5.1%、40.7%、54.2%,基因型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.346);G和A等位基因的頻率在兩組中分別為28.0%、72.0%和25.5%、74.5%,兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.214)。
　　(3)基因分型與主要臨床特征的關(guān)系:分析rs243324多態(tài)性與SLE主要臨床特征潛在的易感性關(guān)聯(lián),結(jié)果顯示在445例SLE患者中以上各位點(diǎn)的基因型與顴部

10、紅斑、光敏感、口腔潰瘍、狼瘡腎炎、關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)損害均無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P>0.05)。
　　結(jié)論:研究結(jié)果顯示,SOCS1基因rs243324位點(diǎn)多態(tài)性可能與中國(guó)漢族人群SLE遺傳易感性無關(guān)。
　　第二部分:SOCS1基因mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的:比較SLE患者組和正常對(duì)照組、SLE腎炎組和非腎炎組以及活動(dòng)期SLE患者組和非活動(dòng)期SLE患者組,SOCS1基因mRNA表達(dá)水平的差異,分析其與SLE臨

11、床特征以及疾病活動(dòng)度的關(guān)聯(lián),并探討SOCS1基因多態(tài)性與mRNA水平之間的關(guān)系。
　　方法:選取研究一的SLE新發(fā)病例34例和正常對(duì)照34例。參照SLE疾病活動(dòng)指數(shù)、美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn),收集病例的臨床和實(shí)驗(yàn)室資料。采集研究對(duì)象外周血,提取RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(realtimequantitativepolymerasechainreaction,RTQ-PCR)技術(shù)檢測(cè)PBMC中SOCS1

12、基因mRNA表達(dá)水平,利用Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)比較在SLE病例組和對(duì)照組間是否存在差異。Spearman相關(guān)分析SOCS1基因mRNA表達(dá)水平與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEdiseaseactivityindex,SLEDAI)的關(guān)系。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　(1)SOCS1mRNA表達(dá)水平:RTQ-PCR結(jié)果顯示SLE患者PBMC中SOCS1mR

13、NA表達(dá)水平低于正常對(duì)照水平(P<0.001),活動(dòng)期SLE患者組低于非活動(dòng)期患者組(P=0.015),然而狼瘡腎炎組與非狼瘡腎炎組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)SOCS1mRNA表達(dá)水平與SLE主要臨床特征的關(guān)系:分析結(jié)果顯示SLE患者SOCS1mRNA表達(dá)與光敏感有關(guān)(P=0.004),而對(duì)SLE患者SOCS1mRNA水平與其他臨床特征如顴部紅斑、關(guān)節(jié)炎、口腔潰瘍之間的研究均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(均有P>0.05)。
　

14、　(3)SOCS1mRNA表達(dá)水平與SLEDAI的關(guān)系:分析結(jié)果顯示SLE患者SOCS1mRNA表達(dá)水平與SLEDAI呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.372,P=0.030)。
　　(4)SOCS1基因多態(tài)性與mRNA水平的關(guān)系:將68名研究對(duì)象SOCS1基因位點(diǎn)rs243324的基因分型結(jié)果,按基因型分組比較mRNA表達(dá)水平,結(jié)果均未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:SLE患者SOCS1mRNA表達(dá)水平降低,且活動(dòng)期患者表達(dá)水平低于非活動(dòng)