IL-22RA1基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病相關(guān)性的研究.pdf

1、前言:
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一個可累及全身多個系統(tǒng)的慢性炎癥性自身免疫性疾病。SLE臨床表現(xiàn)各異,可累及皮膚、粘膜、關(guān)節(jié)、腎臟、肺、心臟、血液系統(tǒng)等多個系統(tǒng)。SLE病因不清,可能與遺傳、性激素、感染及環(huán)境、機體免疫異常等多種因素有關(guān)。目前一般認(rèn)為SLE的發(fā)病是激素和環(huán)境因素觸發(fā)了具有遺傳易感性的個體發(fā)生了免疫異常,最終導(dǎo)致各個臟器損傷。近年來白細(xì)胞介素22(interleukin-22,IL-22)作為主要由Th17

2、分泌的新型細(xì)胞因子受到國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注。ChengF等最早描述了,SLE患者血清IL-22水平的降低與SLE之間存在關(guān)聯(lián)。但是其作用機制還不明確,尚不明確IL-22促進(jìn)SLE發(fā)生發(fā)展還是在SLE發(fā)病中具有保護(hù)作用。所以我們假設(shè)IL-22受體在SLE中可能有異常,導(dǎo)致IL-22作用的不一致性。
　　 IL-22必須與其特異性受體IL-22R結(jié)合才能發(fā)揮作用。IL-22的受體是由2條鏈組成的異源二聚體,分別稱為IL-22RA1(int

3、erleukin22receptor,alpha1)和IL-10RB(interleukin10receptor,beta)。IL-22受體的2條鏈都能結(jié)合IL-22,且只有兩條鏈在一起時才形成功能性的受體復(fù)合物,經(jīng)JAK-STAT信號傳導(dǎo)途徑系統(tǒng)向細(xì)胞內(nèi)傳遞興奮性或抑制性信號。
　　 近年來有研究表明,IL-22和IL-22受體可能與某些自身免疫性疾病,如自身免疫性肝病、銀屑病、克羅恩病、紅斑狼瘡、(類)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫

4、性多內(nèi)分泌腺病綜合征Ⅰ型等密切相關(guān)。同時,我們的前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),位于新西蘭小鼠NZB第4號染色體60cM附近的D4Mit71區(qū)域存在與鼠狼瘡性腎炎(lupusnephritis,LN)發(fā)生密切相關(guān)的易感基因。我們推測在微衛(wèi)星標(biāo)計D4Mit71附近63cM處的白細(xì)胞介素22受體Al(interleukin-22receptoralpha1,IL-22RA1)基因外顯子單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphis

5、m,SNP)在SLE發(fā)病過程中可能起一定作用。
　　 目前,國內(nèi)外學(xué)者對于人IL-22R基因多態(tài)性與SLE相關(guān)性的研究較少。本研究對20例中國北方漢族人群IL-22RA1外顯子進(jìn)行了基因測序,得到了中國漢族人IL-22RA1外顯子基因多態(tài)性的分布情況,進(jìn)而篩選出分布頻率大于0.1的能導(dǎo)致編碼氨基酸改變的有義SNP位點進(jìn)行了疾病相關(guān)性分析。為進(jìn)一步明確IL-22RA1在SLE發(fā)病過程中的作用。
　　 材料和方法:
　

6、　 一、實驗材料
　　 (一)研究對象
　　 按1982年美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn),選取1999-2004年中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院SLE并患狼瘡性腎炎的住院患者共335例,男25例,女310例。健康對照組437例,來源于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢中心,男35例,女401例。2組的年齡、性別比例差異無統(tǒng)計學(xué)差異,所有被研究對象均為北方人,無親緣關(guān)系。
　　 (二)主要試劑
　　 T

7、RNZOL液(Takara)、異丙醇、DEPC水、IL-22RAl引物(上海生工)、TBE緩沖液、PCR試劑盒(上海生工)、測序試劑盒(ABI公司)、硝酸銀、瓊脂糖、無水碳酸鈉、三氯乙酸、甲醇、硫代硫酸鈉、甲醛、甲叉雙丙烯酰胺、TEMED、丙烯酰胺、APS、乙醇、乙酸、DNA回收試劑盒(上海生工)
　　 二、實驗方法
　　 利用基因測序、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)電泳技術(shù)對中國北方漢族人群IL-2

8、2RA1基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)進(jìn)行篩選,通過比較有義SNP的基因型和等位基因在SLE病例組與健康對照組中的分布,進(jìn)而研IL-22RA1與SLE/LN的相關(guān)性。
　　 三、統(tǒng)計學(xué)分析
　　 采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 在IL-22RA1基因第7外顯子處存在1個有義SNP位點,該位點存在3種基因型,即C/C型、C/G型和G/G型。各型在SLE病例組