熱休克蛋白47與喉鱗狀細(xì)胞癌臨床預(yù)后相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　研究喉鱗狀細(xì)胞癌(LSCC)患者熱休克蛋白47(HSP47)的表達(dá)情況，分析其與腫瘤形成及其臨床預(yù)后的相關(guān)性，并深入探討其潛在的作用機制。
　　方法:
　　共收集71例LSCC患者標(biāo)本，記錄并完善臨床相關(guān)統(tǒng)計資料。用蛋白免疫印跡法和免疫組化法檢測HSP47在LSCC組織及癌旁組織中的表達(dá)。通過生存曲線分析，分析HSP47與LSCC的臨床預(yù)后相關(guān)性。為進(jìn)一步明確HSP47在細(xì)胞活性、腫瘤侵襲以及細(xì)胞凋亡等方面

2、所起的作用，我們應(yīng)用質(zhì)粒以及小干擾RNA(siRNA)對Hep-2細(xì)胞進(jìn)行體外實驗。采用CCK-8法來評估Hep-2細(xì)胞的增殖能力及對藥物的敏感性;應(yīng)用細(xì)胞劃痕和transwell實驗分別來分析Hep-2細(xì)胞的遷移和侵襲能力;此外，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)來分析細(xì)胞周期凋亡，通過蛋白免疫印跡法來檢測熱休克蛋白47對凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　蛋白質(zhì)免疫印跡及免疫組化結(jié)果顯示，HSP47在LSCC組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組

3、織，其低表達(dá)與喉癌的不良預(yù)后顯著相關(guān)。同時，在免疫組化中，HSP47的表達(dá)量隨著病理級別的降低而降低。細(xì)胞活性實驗顯示，Hep-2細(xì)胞在轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HSP47后，其生長出現(xiàn)了明顯的抑制。在轉(zhuǎn)染96小時后，與對照組相比，細(xì)胞活性減少了8.7％。相反地，在轉(zhuǎn)染si-HSP4796小時后，Hep-2細(xì)胞株活性提高了4％。細(xì)胞劃痕實驗顯示，上調(diào)HSP47的表達(dá)，能有效抑制Hep-2細(xì)胞的遷移，與對照組相比，Hep-2細(xì)胞遷移能力下降了約20％(P＜

4、0.05)。同樣地，細(xì)胞transwell實驗顯示，上調(diào)HSP47的表達(dá)可顯著抑制Hep-2細(xì)胞的侵襲能力，與對照組相比，Hep-2細(xì)胞侵襲能力下降了30％(P＜0.05)。此外，上調(diào)HSP47的表達(dá)，顯著增加了Hep-2細(xì)胞對順鉑藥物的敏感性。用藥48小時后，Hep-2細(xì)胞的藥物敏感性增加了26.5％。相反地，沉默HSP47，大大地增加了Hep-2細(xì)胞對順鉑藥物的抵抗性，用藥48小時后，藥物敏感性降低了16.5％。流式實驗顯示，上調(diào)H

5、SP47的表達(dá)后，Hep-2細(xì)胞可有效地被阻滯在G1期。與對照組相比，G1期阻滯增加了5.11％(P＜0.05)。與此同時，上調(diào)HSP47后，早期凋亡細(xì)胞與對照組相比增加了8.19％(P＜0.05)。最后，通過對凋亡相關(guān)蛋白的檢測我們發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染質(zhì)粒HSP47后，與對照組相比，除了Bcl-2表達(dá)下調(diào)外，Bax、PARP、caspase-7、caspase-8、caspase-9均表現(xiàn)出不同程度地上調(diào)。
　　結(jié)論:
　　研究表