FTY720對淋巴瘤細(xì)胞株Raji增殖、凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察FTY720對淋巴瘤細(xì)胞株Raji增殖、凋亡的影響,探討其可能的作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 將Raji細(xì)胞復(fù)蘇后重懸于含15%胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的RPMIl640培養(yǎng)液中,置于37℃、5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2-3天換液一次,取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
　　 2、CCK-8

2、法檢測FTY720對Raji細(xì)胞的增殖抑制率
　　 試驗(yàn)分為7組,A:不加藥對照組、B:1.25、C:2.5、D:5、E:10、F:20μmol/LFTY720組,G:空白對照組加入200μl無血清培養(yǎng)基,不接種細(xì)胞。37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)48h。每孔加入20μlCCK-8試劑,置37℃培養(yǎng)箱中孵育2h,450nm處檢測各孔吸光值。
　　 3、AnnexinV/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率<

3、br>　　 分別收集不加藥對照組、1.25及2.5μmol/LFTY720組處理48小時的細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率。
　　 4、用半定量RT-PCR分析細(xì)胞內(nèi)BeL-2及Caspase-3、9mRNA的基因表達(dá)水平
　　 分別收集不加藥對照組、1.25及2.5μmot/LFTY720組處理48小時的細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA,反轉(zhuǎn)錄得到對應(yīng)的cDNA,應(yīng)用RT-PCR分析細(xì)胞內(nèi)BCL-2及Caspase

4、-3、9mRNA的基因表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、CCK-8法檢測FTY720對Raji細(xì)胞的增殖抑制率結(jié)果顯示:與對照組相比,不同濃度組FTY720對Raji細(xì)胞的生長都有明顯的抑制作用,且在1.25-20μmol/L范圍內(nèi)呈劑量依賴性,與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2、FTY720對Raji細(xì)胞的細(xì)胞周期影響:不同濃度FTY720(0、1.25、2.5μmol/L)作用于Raj

5、i細(xì)胞48h后,FTY720各處理組G0/G1期細(xì)胞比例分別為(58.01±0.09)%、(66.36±0.25)%、(72.76±0.6)%,S期細(xì)胞比例分別為(28.17±0.50)%、(21.14±0.12)%、(20.78±0.29)%;G2/M期細(xì)胞比例分別為(13.81±0.49)%、(12.50±0.15)%、(6.47±0.55)%。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,隨著FTY720濃度的增加,G0/G1期細(xì)胞明顯增多,S、G2/M期細(xì)胞

6、明顯減少,細(xì)胞阻滯于G0/G1期。
　　 3、FTY720對Raji細(xì)胞凋亡的影響:不同濃度FTY720(0、1.25、2.5μmol/L)作用于Raji細(xì)胞48h后凋亡細(xì)胞明顯增多,凋亡率分別為(0.01±0.18)%、(36.56±0.14)%、(54.41±0.83)%,各濃度組間FTY720對細(xì)胞凋亡率的影響有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4、FTY720對Raji細(xì)胞Bcl-2mRNA,caspase-3

7、、9mRNA表達(dá)的影響:RT-PCR檢測結(jié)果顯示,不同濃度FTY720(0、1.25、2.5μmol/L)作用Raji細(xì)胞48h后,Bcl-2mRNA的相對表達(dá)量分別為1.00±0.07、0.45±0.08、0.41±0.10。隨著FTY720濃度增加,Bcl-2mRNA的相對表達(dá)量逐漸降低,差異具有顯著性(P＜0.01)。Caspase-9mRNA的相對表達(dá)量分別為1.00±0.09、2.00±0.11、2.01±0.16。Caspa

8、se-3mRNA的相對表達(dá)量分別為1.00±0.07、1.77±0.12、1.81±0.09,隨著FTY720濃度增加,caspase-3、9mRNA的相對表達(dá)量逐漸增高,差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、FTY720對Raji細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用,呈濃度依賴性。
　　 2、FTY720使Raji細(xì)胞阻滯于G0/G1期,抑制Raji細(xì)胞的增殖。
　　 3、FTY720使Raj