E-鈣黏蛋白低表達對子宮內(nèi)膜腺上皮細胞遷移遷移、侵襲行為的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：E-鈣黏蛋白（E-cadherin）異常表達和Wnt/β-catenin信號通路的異常激活在腫瘤的遷移、侵襲中起重要作用。前期的研究表明子宮內(nèi)膜異位癥患者中也存在著兩者的異常表達，本研究擬進一步探討E-cadherin和Wnt/β-catenin信號通路在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生中的作用及機制。
　　方法：
　　1.收集因?qū)m頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級（cervical intraepithelial neoplasiaⅢ, CINⅢ）

2、行全子宮切除的育齡期婦女子宮內(nèi)膜18例，進行子宮內(nèi)膜腺上皮細胞（endometrial epithelial cells，EECs）培養(yǎng)。
　　2.將子宮內(nèi)膜腺上皮細胞平均分為兩組1）實驗組（EECs-RNAi）：用攜帶有可敲低 E-cadherin基因（ CDH1）的重組腺病毒（RadE5-CDH1-shRNA）進行轉(zhuǎn)染；2）對照組（EECs-control）：用陰性腺病毒表達載體（HK）進行轉(zhuǎn)染。摸索轉(zhuǎn)染條件，篩選出干擾效果最

3、好的最佳轉(zhuǎn)染濃度。
　　3.Transwell測定轉(zhuǎn)染48h后子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的遷移、侵襲能力；實時定量-聚合酶鏈反應（quantitative real-time-polymerase chain reaction, qRT-PCR）、蛋白免疫印跡（Western blot）分別測定子宮內(nèi)膜腺上皮細胞中E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA和蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：
　

4、　1.當腺病毒轉(zhuǎn)染細胞量為60pfu/每個細胞時效率最高。轉(zhuǎn)染后的子宮內(nèi)膜腺上皮細胞CDH1 mRNA水平表達下降了75.7％，E-cadherin蛋白水平表達下降了63.6%。
　　2.Transwell結(jié)果顯示：EECs轉(zhuǎn)染48h后，EECs-RNAi組、EECs-control組穿過鋪有 Matrigel的 Transwell小室聚碳酸酯膜的細胞數(shù)分別為：37.00±1.37、21.48±1.61；EECs-RNAi組、EE

5、Cs-control組穿過未鋪Matrigel的Transwell小室聚碳酸酯膜的細胞數(shù)分別為：74.38±3.34、45.65±2.56，兩組相比差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.qRT-PCR結(jié)果顯示：EECs轉(zhuǎn)染48h后，與EECs-control組相比， EECs-RNAi組中的β-catenin、cyclinD1和c-myc的mRNA的表達水平分別上升了59.4%、72.0%和93.4%，兩組相比差異有統(tǒng)計

6、學意義（所有的P<0.05）。
　　4.Western blot結(jié)果顯示：EECs轉(zhuǎn)染48h后，與EECs-control組相比， EECs-RNAi組中β-catenin、cyclinD1和c-myc的蛋白表達水平分別上升了84.7%、3.4倍、44.9%，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義（所有的P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.敲低CDH1可促進子宮內(nèi)膜腺上皮細胞的侵襲、遷移能力。
　　2.敲低CDH1使子宮內(nèi)膜