LeY寡糖抗原表達與子宮內(nèi)膜上皮細胞胚胎接受潛能的研究.pdf

1、目的：胚胎著床是復(fù)雜的程序化的生理過程，它包括一系列發(fā)生在胚胎與子宮之間的同步協(xié)調(diào)的變化。著床始于游離子宮上皮細胞和胚泡之間的識別，進行定位并黏著，隨后胚泡的滋養(yǎng)外胚層細胞穿透子宮內(nèi)膜的表面，胚泡進而植入子宮基質(zhì)。 Lewis Y（LeY）抗原，是雙巖藻糖基化的寡糖[Fucl→2Galβ1→4（Fuc1→3）GlcNAcβ1→R]。LeY抗原主要見于發(fā)育早期的胚胎、內(nèi)皮細胞以及中性粒細胞。FUT4催化了LeY的合成的最后一步反

2、應(yīng)，因此是LeY合成的關(guān)鍵酶。 本文主要研究FUT4及LeY寡糖抗原的表達及其在兩種接受態(tài)子宮內(nèi)膜中的作用的調(diào)控進行對比和分析。 方法：本文選取代表高接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細胞（RL95-2細胞系）與低接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細胞（HEC-1A細胞系），應(yīng)用了RT-PCR、Western Blot方法檢測FUT4在兩種細胞中的表達情況；應(yīng)用細胞轉(zhuǎn)染實驗，將FUT4過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細胞，將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細

3、胞，并在免疫組化實驗中，通過對FUT4的表達進行調(diào)控后來檢測RL95-2細胞及HEC-1A中FUT4，LeY的表達情況；采用細胞黏附實驗分別觀察人胚胎細胞（JAR cell）與高接受態(tài)和低接受態(tài)子宮內(nèi)膜細胞的黏附率，同時將FUT4過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細胞，將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細胞，觀測經(jīng)轉(zhuǎn)染FUT4不同質(zhì)粒后的子宮內(nèi)膜細胞與JAR細胞的黏附情況，最后分別向兩種細胞中加入LeY特異性抗體AH6，進一步檢測LeY與兩

4、種不同狀態(tài)子宮內(nèi)膜細胞的黏附率及表達情況。 結(jié)果：Western blot、RT-PCR實驗顯示RL95-2細胞中FUT4的表達明顯高于HEC-1A細胞；細胞黏附實驗表明胚胎細胞（JAR細胞）與RL95-2細胞的黏附率高于與HEC-1A細胞的黏附率；通過將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細胞，F(xiàn)UT4的表達下降，與JAR細胞的黏附率下降；FUT4過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細胞，F(xiàn)UT4的表達升高，與JAR細胞的黏附率升高：經(jīng)