蒽醌類成分的體內(nèi)外檢測研究.pdf

1、本論文以何首烏、大黃以及決明子為研究對象，采用HPLC、HPLC-IT/MS、UPLC-QQQ/MS以及UPLC-Q-TOF/MS等現(xiàn)代檢測手段，對所選藥材中主要活性成分大黃素型蒽醌類化合物進(jìn)行體內(nèi)外的定性定量研究，比較不同藥材中蒽醌類化合物體內(nèi)外代謝差異，結(jié)合蒽醌類化合物的研究現(xiàn)狀，以期系統(tǒng)的認(rèn)識其在體內(nèi)外的表現(xiàn)形式，為明確蒽醌類化合物是否具有肝腎毒性提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　（1）采用同一種供試品制備方法完成了10批生首烏、20批制

2、首烏、11批大黃以及8批決明子藥材的含量測定。該供試品制備方法的重復(fù)性在1.1~3.5％，對三藥材主要指標(biāo)成分的加樣回收率在95.31~107.06%，且供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。何首烏藥材中蒽醌成分含量差異明顯，結(jié)合蒽醌含量最高有0.25%左右，最低含量只有0.01%，大部分何首烏藥材蒽醌含量低于2010版《中國藥典》的規(guī)定。11批大黃藥材中蒽醌成分含量均能達(dá)到2010版《中國藥典》相關(guān)規(guī)定，各批藥材蒽醌含量相差不大，且單一蒽醌成分

3、之間也無顯著差異，均以大黃酚含量最高。8批決明子藥材中，來源印度兩批決明子中大黃酚含量過低，不符合2010版《中國藥典》中大黃酚的規(guī)定。這三種藥材所含蒽醌種類及藥材含量均有明顯區(qū)別，其中以大黃中蒽醌含量最大，決明子中蒽醌種類多，而何首烏中種類少及含量低。
　?。?）解析何首烏中結(jié)合蒽醌的主要存在形式。本文根據(jù)實驗室自制的幾種結(jié)合蒽醌對照品，采用HPLC-IT/MS的方法對何首烏藥材中的結(jié)合蒽醌進(jìn)行定性分析，確定何首烏藥材含有大黃素

4、-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷與大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷兩種結(jié)合蒽醌。
　?。?）運用UPLC-QQQ/MS對蒽醌成分體內(nèi)代謝進(jìn)行分析考察。給予SD大鼠相同蒽醌含量的大黃和何首烏藥材，大黃給藥劑量為10g/kg，何首烏給藥劑量為21g/kg（生藥/大鼠），何首烏提取物和大黃提取物體內(nèi)均能檢測到3個目標(biāo)成分，其共有成分為大黃素及大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，比較兩成分的血藥濃度及藥代參數(shù)發(fā)現(xiàn)，何首烏組中大黃素

5、及大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷吸收較大黃組中快，且達(dá)峰濃度高于大黃組，但是其在何首烏中的消除也較大黃劑量組快。說明何首烏及大黃中其他的成分會影響大黃素及大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的吸收和代謝。
　　（4）運用UPLC-Q-TOF/MS對蒽醌單體體外肝微粒體孵育代謝進(jìn)行產(chǎn)物分析。選取大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚等7種蒽醌單

6、體作為代謝底物，以大鼠、小鼠、比格犬及人四種不同肝微粒體進(jìn)行體外孵育。Ⅰ相反應(yīng)主要為氧化反應(yīng)，存在-CH3→-CH2OH→-COOH逐步氧化的轉(zhuǎn)化。Ⅱ相反應(yīng)除大黃素甲醚外存在相應(yīng)的葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物，產(chǎn)物數(shù)目與底物結(jié)構(gòu)的羥基數(shù)目相關(guān)。個別蒽醌單體代謝存在明顯種屬差異。
　?。?）為何首烏、大黃及決明子藥材安全性評價試驗，采用動態(tài)優(yōu)化法對所選的3種中藥材進(jìn)行提取工藝優(yōu)化。三藥材水提提取工藝確定如下：何首烏10倍量回流提取3次，提取