二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿對人牙周膜細胞群增殖以分化能力影響的初步探究.pdf

1、目的：本論文的研究的內(nèi)容是，探索二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿這兩種中藥成分，應用這兩種成分來影響我們體外分離培養(yǎng)出的人牙周膜細胞群，觀察這兩種中藥成分對于我們?nèi)搜乐苣ぜ毎鲋?、總蛋白及堿性磷酸酶活性的影響。探討此兩種中藥成分對于預防及治療牙周疾病的可能性，為科學合理的推進該兩種藥的有效成分在牙周相關疾病的應用提供理論依據(jù)。
　　方法：對于牙周膜細胞群的原代培養(yǎng)的方法，采用的是蓋玻片覆蓋組織塊法。我們觀察這批培養(yǎng)出的細胞的狀態(tài)，利用倒置

2、顯微鏡觀察培養(yǎng)出的細胞的形狀及生長情況；使用MTS法繪制細胞生長的曲線，分別在細胞第1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天以及8天測牙周膜細胞的OD值，繪制MTS曲線，觀察曲線的走勢，分析細胞的增長；使用免疫組織化學法，目的是來確定所培養(yǎng)出來的細胞是否是來自于間充質(zhì)，而沒有其他組織的細胞混雜進去；對培養(yǎng)出的細胞進行成骨誘導21天，使用茜素紅染色，觀察經(jīng)過誘導過后的所培養(yǎng)出來的細胞是否具有礦化結節(jié)，用來說明所培養(yǎng)的細胞經(jīng)礦化誘導后可以成

3、骨份化；采用含二氫楊梅素濃度為80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM培養(yǎng)液，以及含鹽酸千金藤堿濃度為10μmol/L、8μmol/L、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM培養(yǎng)液，分別采用MTS法、考馬斯亮藍染色法、ALP堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測后觀察不同濃度二氫楊梅素、鹽酸千金藤堿對牙周膜細胞群增殖活性、總蛋白濃度及堿性磷酸酶活性的影響。用MTS法使兩種藥物不

4、同濃度分別作用于牙周膜細胞群24h、48h以及72h，觀察細胞的增殖情況；采用考馬斯亮藍染色法，將兩種藥物不同濃度分別作用于牙周膜細胞群72h，測量牙周膜細胞的總蛋白含量是否有變化；將不同濃度的該兩種藥物分別作用于牙周膜細胞，應用堿性磷酸酶試劑盒，測量藥物作用于牙周膜細胞后，其堿性磷酸酶的活性有否增高。
　　結果：
　　1、電子顯微鏡下觀察，活性較好的組織塊，在鏡下觀察可見組織塊通體呈金黃色，而活性較差，或者沒有貼壁的組織塊

5、則鏡下觀可見組織塊漂浮或者發(fā)黑。對于活性較好的組織塊，到第5天至10天，會有細胞從組織塊中游出，開始爬出排列紊亂的細胞，沒有任何規(guī)則，散布在活性較高的組織塊附近，其梭型、胞體豐滿，兩頭尖尖，與其他細胞相連，此時細胞具有了細長的胞體凸起。在細胞的正中央，或者附近，可以看到我們的胞核，它的核是圓形或者橢圓的形狀沒有完全的規(guī)則和統(tǒng)一。MTS測定顯示牙周膜細胞群它的增殖繪制出的曲線規(guī)律是S形狀；其免疫組化結果：第3代PDLP其強陽性表達的為波形

6、蛋白，陰性的表達為角蛋白；PDLP成骨誘導21天后顯示有礦化結節(jié)的形成，而沒有經(jīng)過誘導的空白對照組僅有少數(shù)結節(jié)，多數(shù)沒有，并且茜素的紅染色呈陽性，且肉眼即可分辨。
　　2、不同濃度的二氫楊梅素以及鹽酸千金藤堿對PDLP增殖及總蛋白的影響
　　(1)MTS結果顯示：含二氫楊梅素80μmol/L、40μmol/L、20μmol/L、10μmol/L、5μmol/L的DMEM全培以及含鹽酸千金藤堿10μmol/L、8μmol/L、

7、6μmol/L、4μmol/L、2μmol/L的DMEM全培分別作用于PDLP24h、48h、72h后，結果顯示各濃度組以及均可促進牙周膜細胞的增殖（P<0.05）。
　　(2)總蛋白量檢測：對于二氫楊梅素以及鹽酸千金藤堿作用于PDLP，PDLP的總蛋白實驗組對于對照組，有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但是各實驗組之間的濃度沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3、二氫楊梅素和鹽酸千金藤堿堿性磷酸酶測試結果
　　二氫楊梅