氟對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖及礦化能力的影響.pdf

1、目的:
　　氟是一種在人體成長發(fā)育過程中必需的微量元素。但長期通過飲食攝入過量的氟可引起硬組織的慢性病變，主要表現(xiàn)為氟斑牙和氟骨癥。歷年來有大量的關(guān)于氟與硬組織的研究，其關(guān)注點(diǎn)較多地集中在氟中毒所致病變的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制方面。多數(shù)文獻(xiàn)均證實(shí)氟能夠增強(qiáng)成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的增殖及礦化能力。而目前在對(duì)如何促進(jìn)牙周組織再生的組織工程技術(shù)研究中，較少關(guān)注氟元素的利用。本研究將不同濃度的氟化鈉(NaF)添加入體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞（human

2、 periodontal ligament cells，hPDLCs）中，觀察其對(duì)hPDLCs增殖及礦化能力的影響，為臨床治療過程中將氟添加入牙周藥物來促進(jìn)牙槽骨恢復(fù)提供一定的基礎(chǔ)研究依據(jù)。
　　方法:
　　從門診上收集因正畸等治療需求而拔除的健康前磨牙、第三磨牙，從根中1/3刮取的牙周膜組織中分離、培養(yǎng)并鑒定hPDLCs;通過細(xì)胞活力檢測試劑盒(cell-counting kit-8，CCK-8)測定不同濃度的NaF對(duì)hP

3、DLCs增殖能力的影響，并選取三組無毒害作用的濃度用于礦化能力的觀察實(shí)驗(yàn);使用第4～6代hPDLCs，配制NaF終濃度為1×10-5、5×10-4和1×10-3 mol/L的礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以無氟的礦化誘導(dǎo)組為對(duì)照，通過堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)活性檢測、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chainreaction，qRT-PCR)和茜素紅染色及

4、鈣結(jié)節(jié)定量檢測法測定不同濃度NaF對(duì)hPDLCs礦化能力的影響。本研究采用SPSS20.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的單因素方差分析，數(shù)據(jù)均用Mean±SD表示，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、成功從牙周膜組織中分離培養(yǎng)出hPDLCs，且細(xì)胞形態(tài)正常，狀態(tài)良好;免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定表明細(xì)胞成分較單一，細(xì)胞可靠，可用于后續(xù)試驗(yàn)。
　　2、細(xì)胞活力檢測結(jié)果表明，NaF終濃度在5×10-5、1×10-4、5×

5、10-4 mol/L時(shí)均能提高h(yuǎn)PDLCs的增殖能力，且5×10-4 mol/L的濃度組可以觀察到最佳的促進(jìn)細(xì)胞增殖能力的效應(yīng)（P＜0.05）。從各濃度中篩選出三組對(duì)細(xì)胞無毒害作用的終濃度，用于礦化實(shí)驗(yàn)，以不含氟的細(xì)胞組為對(duì)照。
　　3、堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果表明，添加NaF孵育14 d后，與對(duì)照組相比，NaF終濃度為1×10-5 mol/L實(shí)驗(yàn)組的堿性磷酸酶染色陽性面積最大(P＜0.05)，由此可知1×10-5 mol/L的Na

6、F能顯著提高ALP活性;qRT-PCR的數(shù)據(jù)則根據(jù)各實(shí)驗(yàn)分組的時(shí)間監(jiān)測點(diǎn)、指標(biāo)等因素表現(xiàn)出較大的變化，未能觀察到較為一致的劑量-效應(yīng)關(guān)系;茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)定量檢測法結(jié)果表明，添加不同濃度NaF培養(yǎng)細(xì)胞28 d后，1×10-5 mol/L的NaF終濃度添加組中可觀察到較多的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量，且萃取染料定量檢測結(jié)果也提示1×10-5 mol/L的NaF實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比鈣含量顯著增多(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)證實(shí)當(dāng)